Para comenzar, agregue fibrinógeno marcado con fluorescencia a tres mililitros de sangre entera humana cirada para lograr una concentración final de 60 microgramos por mililitro. Configure el Chandler Loop con un tambor de 120 milímetros de diámetro en un baño de agua a 37 grados centígrados. Corta un tubo PCR estándar de 200 microlitros y conecta los extremos del tubo.
Para iniciar la coagulación de la sangre, agregue 176 microlitros de cloruro de calcio de 200 milimolares en los tres mililitros de sangre completa. Después de mezclar correctamente con una inversión suave, usando una jeringa de tres mililitros, cargue la sangre en el tubo. Coloque inmediatamente el tubo en el tambor Chandler Loop, conectando los extremos.
En condiciones de poca luz, gire el tambor parcialmente sumergido en el baño de agua a 40 RPM. Después de 40 a 60 minutos, retire los coágulos del tubo. Las características de sangre total marcadas con fibrinógeno FITC mostraron una dispersión uniforme de la fluorescencia bajo luz ultravioleta.
Además, la variación del grado de fibrinógeno FITC en la sangre total no altera el peso de los coágulos.
