Aislamiento y canulación de vasos linfáticos mesentéricos para medir el citosólico, el calcio libre y el diámetro de los vasos en vasos linfáticos en contracción

Para empezar, toma un hilo de sutura de seda trenzado y sepáralo en un solo filamento. Use dos pinzas Dumont 5 con puntas micro romas y pinzas para hacer un bucle doble alrededor de la punta de las otras pinzas. Con las pinzas en asa, agarre el extremo suelto de la sutura y tire con cuidado a través de ambos bucles.

Emplea tijeras de resorte de vannas para recortar el exceso de suturas de ambos lados. Después de decapitar a la rata sacrificada, haz un corte longitudinal a lo largo de la línea media de la pared abdominal. A continuación, exterioriza el mesenterio.

Corta la conexión justo debajo del esfínter pilórico, aproximadamente dos o tres centímetros por encima del ciego, así como la conexión con el recto. Luego, enjuague los mesenterios enteros disecados en 200 mililitros de solución salina fisiológica helada. Posteriormente, transfiéralos y asegúrelos en una placa de Petri revestida de silicona que contenga una solución salina fisiológica helada.

Usando un microscopio estereoscópico, pinzas finas Dumont 5 de acero inoxidable y tijeras de resorte vannas, diseccionan los vasos linfáticos mesentéricos de segundo orden de la grasa circundante y el tejido conectivo. Ahora, transfiera el vaso linfático disecado a la cámara de profusión del vaso para la canulación en cánulas de vidrio. Deslice un solo nudo bonito en cada cánula de vidrio en preparación para asegurar el recipiente en las cánulas más tarde.

Con un pequeño trozo de grasa, oriente la dirección del vaso linfático y canula el extremo distal en P1. Deslice el nudo por la cánula y apriételo para asegurar el vaso linfático. Luego, presurice el vaso linfático para fortificar milímetros de mercurio en la cámara de perfusión. Coloque una piedra burbujeante con 7% de dióxido de carbono y 93% de oxígeno en la cámara de baño para mantener el pH fisiológico.

Conecte la cámara al regulador de temperatura y ajústela a 37 grados centígrados.