Procedimiento de fijación y postfijación de organoides retinianos para la preparación de muestras TEM

Para iniciar la fijación anterior de los organoides retinianos o RO derivados de células madre pluripotentes inducidas. Con una pipeta, mueva suavemente una de las ósmosis inversas cultivadas de la placa de Petri a un tubo de microcentrífuga de 1,5 mililitros. Con la ayuda de una pipeta, retire el medio de cultivo del tubo de microcentrífuga y agregue 1,5 mililitros de fijador de 2% de paraformaldehído, 2% de glutaraldehído.

Una vez fijadas las ósmosis inversa, retire el fijador de paraformaldehído-glutaraldehído antes de proceder a lavar los organoides. Suspenda suavemente los organoides en el tubo de microcentrífuga agregando 1 mililitro de PBS 0.01 molar para asegurar un lavado completo. A continuación, pipetee cualquier PBS restante y sustitúyalo por aproximadamente 150 microlitros de ácido ósmico al 1% hasta que los bloques de tejido queden sumergidos.

Coloque el tubo de microcentrífuga en una caja oscura.