Recolección y siembra de células endoteliales de la vena umbilical humana (HUVEC) para el modelo de intestino humano en chip

Para comenzar, prepare una dilución de 1 a 100 de una solución madre de colágeno en DPBS con magnesio y calcio. Agregue 350 microlitros de la solución madre diluida a la cámara respectiva e incube durante cinco minutos a temperatura ambiente. Enjuague todas las cámaras dos veces con 350 microlitros de DPBS con magnesio y calcio para eliminar el colágeno y el ácido acético restantes.

Retire los enchufes de un sitio y cámbielos al otro lado. Después de enjuagar la cámara nuevamente, agregue 350 microlitros de medio de crecimiento de células endoteliales. Retire los enchufes de un sitio y cámbielos al otro lado.

A continuación, añada 350 microlitros de medio de crecimiento de células endoteliales a cada cámara. Tome HUVEC cultivados en los pasajes uno a tres con 80% a 90% de confluencia celular en el medio de crecimiento de células endoteliales. A continuación, retire el medio de cultivo celular de un matraz de cultivo celular T25 y lave las células suavemente con tres a cinco mililitros de DPBS sin magnesio ni calcio.

Una vez retirada la solución, añadir un mililitro de reactivo de disociación de tripsina e incubar durante cinco minutos a 37 grados centígrados hasta que las células se desprendan del matraz. Transfiera las células desprendidas a un tubo utilizando nueve mililitros de 5%FBS en PBS sin magnesio ni calcio. Centrifugar a 350 g durante cinco minutos a temperatura ambiente.

Después de mover el sobrenadante, vuelva a suspender el pellet de células en un mililitro de medio de crecimiento de células endoteliales. Agregue el volumen respectivo de células a la cámara e incube los biochips en una incubadora humidificada a 37 grados Celsius y 5% de dióxido de carbono. Realizar un intercambio de medio de la cámara contenedora de HUVECs con 350 microlitros de medio de crecimiento de células endoteliales después de 24 horas.

Si aparecen burbujas de aire en los biochips microfluídicos, cierre todos los puertos del biochip además de los puertos de la cámara afectada. Incline la viruta para mover la burbuja de aire cerca de un extremo de la cavidad. Desde el puerto del otro extremo, empuje 700 microlitros de medio de cultivo celular a través de la cámara mientras sostiene los tapones opuestos.