Experimentación de la evolución de la temperatura con Sulfolobus acidocldarius

Para empezar, utilice las poblaciones ancestrales revividas de Sulfolobus acidocaldarius. Añada BBM plus para diluir los cultivos hasta un OD600 de 0,01. Pipetee el volumen apropiado de cada uno de los siete cultivos en tres tubos perforados separados de dos mililitros.

Selle los tubos con una membrana transpirable, luego coloque cada conjunto de siete poblaciones ancestrales en termomezcladores separados. Ajuste cada termomezclador a la temperatura requerida y 400 RPM para comenzar el experimento de evolución. Después de 48 horas, transfiera 15 microlitros de cada uno de los cultivos de transferencia cero a 1,5 mililitros de BBM calentado más medio contenido en un tubo perforado de dos mililitros etiquetado como transfer one.

Selle los tubos con una membrana permeable antes de volver a colocarlos en posiciones aleatorias en los termomezcladores respectivos. Mida el OD600 de transferencia cero en un espectrofotómetro basado en placas para completar la primera transferencia. Repita la transferencia de cultivo y la medición de la densidad óptica cada dos días para realizar transferencias hasta alcanzar el número deseado de transferencias.

Prepare las reservas de glicerol de las poblaciones después de cada 10ª transferencia y en la transferencia final, y etiquete el tubo con el identificador de población ancestral y el número de transferencia. Las termobatidoras deben ajustarse a temperaturas constantes de 75 grados centígrados y 65 grados centígrados. Un tercer termomezclador se disminuirá gradualmente para observar la respuesta al cambio gradual.