Para comenzar, centrifugar los tubos que contienen sangre coagulada a 626 a 1.409 G durante 20 minutos a dos a ocho grados Celsius. A continuación, recoja con cuidado el sobrenadante en un tubo nuevo. Almacene el sobrenadante a menos 80 grados centígrados.
A continuación, configure pocillos estándar y de muestra en blanco. Pipetear 50 microlitros de los patrones diluidos en la placa ELISA. A continuación, transfiera 40 microlitros de las muestras diluidas a los pocillos de muestreo.
Agregue 10 microlitros de suero en los pocillos de muestra. Ahora, selle la placa con una película de sellado. Coloque la placa sellada en una incubadora a 37 grados centígrados durante 30 minutos.
Diluya la solución de lavado 30 veces concentrada con agua destilada para obtener una solución de lavado de concentración única. A continuación, retire la película de sellado de la placa y deseche el líquido. Ahora, llene cada pocillo con 200 microlitros de solución de lavado cinco veces.
Después de desechar el sobrenadante por última vez, seque la placa con golpecitos. Pipetear 50 microlitros del reactivo enzimático en todos los pocillos que no sean los blancos. Luego selle la placa con una película selladora antes de colocarla en una incubadora a 37 grados centígrados durante 30 minutos.
Después de lavar la placa cinco veces más, agregue 50 microlitros de cada uno de los reveladores de color, A y B. Agite la placa suavemente para mezclar bien. A continuación, incubar la placa a 37 grados centígrados con poca luz durante 10 minutos. Ahora, pipetee 50 microlitros de la solución de parada en cada pocillo para terminar la reacción.
Mida la absorbancia de cada pocillo secuencialmente a 450 nanómetros. La concentración plasmática de homocisteína en el grupo de metionina fue dos veces mayor que en el grupo control. Las concentraciones plasmáticas de homocisteína fueron relativamente más bajas en los grupos de tratamiento.
