Para comenzar, coloque el equipo quirúrgico estéril en una plataforma quirúrgica. Aproximadamente 72 horas después de la implantación del electrodo electromiográfico del músculo del diafragma, o EMG, pesa a la rata. Antes de anestesiar a la rata, colócala en una jaula estilo Bowman.
Conecte con cuidado los cables, saliendo del dorso de la rata a un preamplificador para registrar la EMG bilateral del músculo del diafragma. A continuación, coloque a la rata anestesiada en posición prona. Afeita el vello desde el cuello hasta el nivel de las orejas y hasta las escápulas.
Conecte los cables de los electrodos expuestos desde la espalda de la rata al amplificador. Desinfectar la piel alternando con gluconato de clorhexidina al 4% y alcohol isopropílico tres veces. Cubra la rata con fundas quirúrgicas estériles, a excepción del dorso superior.
Con un bisturí, haz una incisión rostrocaudal de cuatro centímetros. Retrae la piel y corta el músculo acromiotrapezius. A continuación, diseccionar el músculo romboidal para exponer los músculos espinales.
Bajo un microscopio quirúrgico, extirpe la columna vertebral de C1 a C3. A continuación, utilice rongeur para realizar cuidadosamente una laminectomía en C2 sin dañar las arterias o los nervios principales. Cortar y retirar la duramadre en C2. Mientras monitorea la EMG del músculo del diafragma, inserte el cuchillo de disección de ángulo justo debajo del punto donde la raíz dorsal ingresa a la médula espinal y corte todo el camino hasta el punto medio de la superficie ventral. A continuación, se registra la actividad EMG del diafragma ipsilateral eupneico en la rata anestesiada con hemisección espinal C2 realizada.
Sutura los músculos de la médula espinal con suturas 3-0 y luego cierra la incisión en la piel. Para mantener la hidratación, inyectar por vía subcutánea un mililitro de suero fisiológico por cada 50 gramos de masa animal. Coloca a la rata en una jaula limpia con una almohadilla térmica para recuperarla.
Ajuste el filtro de paso de banda alta del preamplificador a 100 hercios y el filtro de paso bajo a 1000 hercios. Después de recopilar uno o dos minutos de registro eupneico de EMG de hemidiafragma izquierdo y derecho, guarde la fecha en un formato apropiado para análisis posteriores. Un ejemplo exitoso de hemisección espinal C2 mostró la ausencia de actividad EMG del diafragma ipsilateral eupneico bajo anestesia en el tercer día después de la lesión.
La actividad EMG del músculo diafragma en condiciones de vigilia mostró una reducción en el diafragma ipsilateral eupneico en comparación con el valor basal previo a la lesión. La actividad EMG del músculo diafragma contralateral aumentó tanto en condiciones anestesiadas como despiertas.
