Para comenzar, coloque la tapa de detección en una placa receptora vacía de 96 pocillos y colóquela en la incubadora de cultivos celulares. Alinee y monte el dispositivo en la tapa de detección y conéctelo al hub a través del cable USB provisto, creando un sándwich Recypher. Ahora ve al sitio web de Lucid Lab y haz clic en el botón de nuevo experimento en la esquina superior derecha para crear un nuevo experimento.
Nombra el título del experimento e ingresa las notas experimentales relevantes para el estudio. A continuación, cree condiciones de pozo en los grupos de tratamiento. Por ejemplo, si se prueban los efectos de diferentes concentraciones séricas en los medios sobre la tasa de consumo de oxígeno, seleccione suero en el nombre del grupo concentraciones séricas intermedias que se utilizarán y agregue más valores de porcentaje sérico haciendo clic en el botón más.
A continuación, asigne qué pocillos recibirán un porcentaje de suero determinado y seleccione un patrón de color para esos pocillos. Haga clic en el botón Agregar grupo para agregar más grupos según sea necesario. A continuación, defina la configuración de la placa y seleccione el dispositivo y el estilo de placa correspondientes.
Para hacerlo, haga clic en el botón Agregar placa, elija el dispositivo y seleccione el tipo de placa. Seleccione el tratamiento y haga clic en el pozo correspondiente. Ahora, haga clic en el botón Comenzar ahora para iniciar el experimento.
Compruebe que el indicador en el sitio web y el diodo emisor de luz en el hub estén en verde fijo. Deje que el sistema funcione durante 15 a 60 minutos para permitir que se pruebe que cada sensor esté bien calibrado y detecte oxígeno atmosférico. Luego, retire el dispositivo de la tapa de detección y colóquelo boca abajo en la incubadora para permitir que el motor del dispositivo se reinicie.
Ahora, vuelva a colocar la placa con la tapa de detección en la cubierta de cultivo celular, junto con una placa de 96 pocillos que contiene los cultivos de RPE. Cambie el medio en la placa con cultivos RPE al mismo medio y volumen para todos los pocillos para obtener valores de tasa de consumo de oxígeno de referencia para cada pocillo. A continuación, transfiera la tapa de detección a la placa que contiene cultivos celulares y coloque la tapa estándar en la placa que contiene cultivos celulares en la placa receptora vacía de 96 pocillos, para mantener la esterilidad de la tapa estándar.
Vuelva a colocar la placa con los cultivos celulares y la tapa de detección en la incubadora de cultivos celulares. Alinee y monte el dispositivo en la tapa de detección y conéctelo al hub a través del cable USB provisto. Compruebe que los indicadores de la interfaz del sitio web y del hub estén en verde fijo.
Deje que el dispositivo mida las tasas de consumo de oxígeno o el OCR en cada pozo durante al menos 12 a 24 horas para capturar un OCR de referencia. Después del experimento, sumerja la tapa de detección en etanol al 70% durante 10 minutos en una campana de cultivo celular para esterilizarla. Una vez que el etanol y el agua se hayan evaporado por completo, coloque la tapa de detección en una nueva placa receptora de 96 pocillos.
