Para empezar, coloque colágeno, hidróxido de sodio, agua ultrapura estéril, 10 veces PBS, un tubo de microcentrífuga, ácido hialurónico metacrilato y el fotoiniciador en hielo. A continuación, coloque los insertos de cultivo de tejidos en la placa y etiquétela. Para preparar una solución de colágeno de tres miligramos por mililitro, combine colágeno de alta concentración, un hidróxido de sodio normal, agua ultrapura y 10 veces PBS.
Agregue componentes al tubo de microcentrífuga y mantenga la punta de la pipeta sumergida al mezclar para evitar la formación de burbujas. Después de eso, centrifugar las celdas a 200 G durante cinco minutos a temperatura ambiente. A continuación, retire suavemente el exceso de medios de la parte superior de cada solución de condición de celda, dejando el volumen de medio necesario para la condición.
Coloque estas soluciones en hielo. Agregue el volumen calculado de solución de colágeno a cada solución de condición celular. A continuación, agregue el volumen calculado de ácido hialurónico metacrilato al 1%, seguido de 17 miligramos por mililitro de LAP en cada solución de condición celular.
Mezcle cada tubo de condición uno a la vez mientras mantiene la punta de la pipeta sumergida para evitar la formación de burbujas y agregue de 100 a 150 microlitros a cada inserto de cultivo de tejidos. Ahora encienda la lámpara ultravioleta de 385 nanómetros a una corriente constante. Para reticular cada gel, exponga cada pocillo a la luz ultravioleta durante 45 segundos, uno a la vez.
A continuación, coloque la placa a 37 grados centígrados durante 30 a 45 minutos para entrecruzar el colágeno. Utilizando un medio basal astral con 0,5% y dos volumen por volumen y 1% volumen por volumen B27 sin vitamina A, aplique el cabezal de presión del fluido a los geles. Agregue medios a la placa de pocillos y a los insertos de cultivo de tejidos para obtener un flujo neto cero.
Coloque la placa a 37 grados centígrados, 5% de dióxido de carbono durante al menos 18 horas o hasta cinco días.
