Para empezar, mantenga HEK293T células en medios de cultivo que contengan DMEM con un 10% de FBS en una incubadora humidificada. Verifique la confluencia de la placa bajo un microscopio. Cuando las células alcancen aproximadamente el 80 al 90% de confluencia, retire el medio y lávelas con 10 mililitros de DPBS.
A continuación, retire el DPBS de la placa de cultivo. Tratar las células con un mililitro de rojo fenol al 0,05%tripsina-EDTA e incubar las células durante tres minutos a 37 grados centígrados. Después de retirar la placa de la incubadora, agregue nueve mililitros de medio de cultivo para detener la reacción de tripsina y mezcle pipeteando para desalojar las células restantes.
Ahora, transfiera la suspensión de la celda a un tubo de 50 mililitros. Centrifugar a 300 g durante cinco minutos a temperatura ambiente. Una vez que se haya retirado el medio, vuelva a suspender los gránulos celulares en un mililitro de medio fresco.
Para colocar células en una placa de seis pocillos, combine el volumen necesario de células con 13 mililitros de medio en un tubo de 50 mililitros. Luego, dispense dos mililitros de la suspensión celular diluida en cada uno de los seis pocillos y golpee suavemente la placa por todos lados para distribuir las células de manera uniforme. Después, coloque la placa en una incubadora humidificada a 37 grados centígrados con un 5% de dióxido de carbono durante la noche.
