Extracción de líquido de lavado intercelular de apoplasto de trigo para el análisis de enzimas relacionadas con la pared celular

Para comenzar, enjuague los trozos de hoja de trigo dos veces en agua destilada para eliminar cualquier contaminación citosólica de los extremos cortados. Inserte los trozos de hoja en un tubo de vidrio de paredes gruesas que contenga un tampón de extracción. Con una bomba de chorro de agua, aplique la infiltración al vacío durante cinco minutos para impregnar las hojas con el tampón de extracción.

Retire los trozos de hoja del tubo de vidrio y séquelos con una toalla de papel. Inserte los trozos de hoja seca verticalmente en un tubo de centrífuga preenfriado provisto de un disco perforado. Centrifugar las hojas a 500 g durante 10 minutos a 4 grados centígrados.

Con una pipeta de 100 microlitros, transfiera el sobrenadante a un tubo de microcentrífuga de 1,5 mililitros preenfriado. Guarde el sobrenadante recolectado a menos 20 grados centígrados hasta su uso.