Proceda a realizar la reacción después de funcionalizar ambos extremos del sustrato de ADN lineal. Primero, tome cuatro columnas de centrifugación S-400 y vértice durante al menos 30 segundos para resuspender la resina. Luego, centrífugolos durante un minuto a 735G para eliminar el búfer de almacenamiento.
Transfiera las columnas a tubos limpios de 1,5 mililitros. Inmediatamente, agregue 100 microlitros de la solución de ADN lineal doblemente funcionalizada a cada columna. Centrifugar las columnas durante dos minutos a 735G para que el ADN fluya a través de la columna mientras se conservan los nucleótidos no incorporados.
Después de agrupar el flujo que contiene el ADN de las cuatro columnas, mida el volumen con una pipeta. A continuación, vórtice M-280 perlas magnéticas recubiertas de estreptavidina durante 30 segundos para volver a suspenderlas. Transfiera cuatro miligramos de las perlas magnéticas resuspendidas a un tubo limpio de 1,5 mililitros.
Coloque el tubo en una rejilla magnética durante un minuto para recoger las cuentas antes de retirar el tampón de almacenamiento. Vuelva a suspender las perlas en un mililitro de tampón A mediante vórtice durante cinco segundos antes de incubar las perlas a temperatura ambiente durante cinco minutos. Recoja las cuentas colocando el tubo en un soporte magnético durante un minuto.
Después de retirar el tampón A, vuelva a suspender las perlas en 400 microlitros de tampón A 2X mediante pipeteo. A continuación, añada 400 microlitros de la solución de ADN funcionalizada a las perlas y mezcle suavemente mediante pipeteo. Incubar la mezcla de ADN de perlas durante la noche a cuatro grados centígrados con rotación de extremo a extremo.
Al día siguiente, use la rejilla magnética para eliminar el sobrenadante antes de calcular la cantidad total de ADN unido a las cuentas magnéticas. A continuación, lavar las perlas secuencialmente con tampón B y tampón C. Vuelva a suspender las perlas en 300 microlitros de tampón C y haga cuatro alícuotas de 75 microlitros.
