Para comenzar el recubrimiento con fibronectina, seleccione 12 insertos y 2 placas de 24 pocillos. Coloque los insertos en una placa de pocillo, creando dos filas de seis. Prepare un microgramo por mililitro de solución de fibronectina mezclando 52 microlitros de solución madre de fibronectina y 1,2 mililitros de PBS en un tubo de 1,5 mililitros.
Distribuya 100 microlitros de la solución de fibronectina en cada inserto. Incubar los insertos en la placa del pocillo a 37 grados centígrados durante tres horas. Después de la incubación, retire el exceso de solución de fibronectina de cada inserto.
Lave los insertos dos veces agregando 100 microlitros de agua destilada estéril a cada inserto. Retire el agua en el mismo orden en que se agregó para garantizar un tiempo de lavado constante entre los insertos. Ahora lave los insertos con 100 microlitros de medios de cultivo celular y luego retire los medios de los insertos.
A continuación, siembre 200 microlitros de suspensión de celdas A431 en los insertos. Para el control de negativos, pipetee 200 microlitros de medios de cultivo celular en los insertos. Con un marcador permanente, dibuje una línea que divida la placa del segundo pozo en dos columnas de tres pozos de ancho.
Separe cada columna en filas. Etiquete cada región de la cuadrícula con los parámetros pertinentes. Agregue un mililitro de medio de cultivo celular a cada pocillo.
Transfiera los insertos de la placa de preparación a su ubicación adecuada en la placa de experimento etiquetada e incube a 37 grados centígrados durante 12 horas.
