Coloque el ratón anestesiado en un marco estereotáxico. Identifique bregma y lambda, asegurándose de que no haya más de 100 micrómetros de diferencia de altura entre los dos puntos de referencia. Encuentra y marca las coordenadas calculadas en el cráneo con un lápiz estéril.
Alrededor de las coordenadas, cree un contorno de la ventana de craneotomía de dos milímetros por dos milímetros. Después de verificar la profundidad de la anestesia, use un taladro de alta velocidad para crear una ventana de craneotomía de dos milímetros por dos milímetros. Aplique de 0,5 a 1 mililitro de solución salina normal para evitar que la superficie del cerebro se seque.
Retire la duramadre con una aguja de jeringa y pinzas finas. A continuación, utilice un taladro de alta velocidad para crear un orificio de rebaba separado para el electrodo de referencia de las sondas de silicona, generalmente a uno o dos milímetros de la ventana craneal. Aplique 0,2 mililitros de adhesivo de silicona de baja toxicidad en el cráneo para sellar completamente la craneotomía.
Con la placa de la cabeza y los tornillos, fije la cabeza del ratón a la plataforma de grabación de electrofisiología. A continuación, cubra el vástago de la sonda de silicona con tinte fluorescente para que la trayectoria de la sonda pueda reconstruirse después del experimento. Después de eso, monte la sonda en el manipulador y establezca el ángulo deseado.
Para bajar la sonda de registro a la superficie del cerebro dentro del centro de la ventana craneal, inserte manualmente la sonda a una profundidad de aproximadamente 300 micrómetros. Una vez insertada a esta profundidad, baje lentamente la sonda automáticamente a 200 micrómetros por minuto a la profundidad objetivo para minimizar el daño tisular. Finalmente, aplique aceite mineral a la superficie del cerebro dentro de la ventana de la craneotomía para evitar que se seque.
A continuación, registre los datos de la sonda de silicio y el ECOG a 30 kilohercios utilizando un controlador de grabación Intan. La mayoría de las neuronas registradas disminuyeron su disparo durante la anestesia con sevoflurano. La activación de VLPAG disminuyó significativamente desde el inicio hasta durante el sevoflurano.
Esta disminución fue consistente en todas las neuronas VLPAG.
