Para empezar, conecte una punta de pipeta cortada P200 grande a una jeringa de 10 mililitros y llénela con PBS. Use fórceps para insertar la punta de la jeringa en la abertura de un segmento intestinal aislado del ratón sacrificado. Sostenga el segmento intestinal en la jeringa con las pinzas y enjuague suavemente a una velocidad de aproximadamente 50 microlitros por segundo para eliminar el contenido.
Recoja el contenido intestinal en un recipiente de pesaje vacío. A continuación, coloque el segmento intestinal húmedo en línea recta sobre una tira de papel de filtro de celulosa seco etiquetado. Con unas tijeras de disección, corte el intestino longitudinalmente a lo largo de la línea mesentérica, aproximadamente cinco milímetros a la vez.
Usa el borde inferior de las tijeras o un par de pinzas para colocar el pañuelo cortado plano sobre el papel de filtro. Ahora coloque otro trozo de papel de filtro encima del segmento intestinal para evitar que se encrespe o pierda su forma durante la fijación. Para asegurar el pañuelo en su lugar, engrapa los bordes del papel de filtro evitando grapar el pañuelo.
Sumerja los tejidos en formol tamponado al 10% normal. Retire suavemente la pieza superior de papel de filtro que toca el lado luminal del intestino. Use fórceps para despegar cuidadosamente el intestino de la parte inferior del papel de filtro antes de desecharlo.
A continuación, lave el tejido en PBS tres veces para eliminar la formalina del tejido. Con pinzas de acción inversa, levante un trozo de intestino a lo largo del borde corto con el lado luminal hacia arriba y gire las pinzas para enrollar el tejido. Coloque el pañuelo en un bote de pesaje seco.
Sostenga el tejido en su lugar con pinzas en una mano. Abra con cuidado las pinzas de acción inversa y libere el tejido, utilizando las otras pinzas para desalojar el tejido de las pinzas de acción inversa. Inserte un alfiler de disección de tamaño 00 en el pañuelo.
Use cortadores de alambre para quitar la punta afilada del alfiler. Una vez que se hayan enrollado todas las muestras, coloque los cuatro rollos de tejido en el mismo casete e inserte el casete en un procesador de pañuelos. En una estación de inclusión, coloque una pequeña cantidad de parafina en un molde.
Retire los cuatro rollos suizos del casete y colóquelos en un molde individual, colocándolos lo más planos posible. Agrega más parafina para llenar el molde. Mueva el molde a la placa fría y asegúrese de que todos los rollos suizos estén planos en la parte inferior del molde.
Coloque una tapa de casete pequeña etiquetada en el molde. Una vez que la cera se haya solidificado, retira el bloque del molde.
