Este protocolo proporciona un modelo animal confiable de una hemiseción lateral de la médula espinal que imita el síndrome de Brown-Sequard en los seres humanos, y una nueva escala de comportamiento combinada para evaluar los déficits de comportamiento asimétrico. Este modelo de hemiseción de ratón puede mejorar nuestra comprensión de las deficiencias neurológicas que se producen en el síndrome de Brown-Sequard en humanos. A diferencia de sus evaluaciones mencionadas, nuestra nueva escala de comportamiento combinada se puede aplicar a cualquier molde que requiera déficits asimétricos, locomotoras y en el laboratorio.
El uso de este modelo de hemi-sección consistente y natural puede facilitar la comparación del resultado experimental entre la investigación básica y la traducción. El uso de un resultado consistente con este modelo puede ser difícil para los principiantes. El paso crítico es colocar la aguja verticalmente en la línea media, como guía para inducir la lesión.
Después de ver este video, usted debe tener una buena comprensión de cómo realizar tanto el procedimiento quirúrgico como el comportamiento. El día del procedimiento, limpie la mesa quirúrgica con 70% de etanol y coloque una almohadilla de calentamiento precalentada sobre la mesa. Después de cubrir el área quirúrgica con una cortina quirúrgica estéril, confirme la falta de respuesta a la denliz del dedo del pie en una rata anestesiada.
Aplicar ung ón en los ojos del animal para evitar el secado de la córnea, y afeitar el cabello sobre las vértebras torácicas. A continuación, limpie la piel expuesta con tres exfoliantes alternados a base de yodo y etanol. Cuando el animal esté listo, localice la decimotercera costilla y siga la costilla dorsal para identificar su conexión con la vértebra T-13.
Cuente hasta identificar la vértebra T-9, y use una hoja de escalpelo número quince para hacer una incisión de la piel de línea media de tres a cuatro centímetros sobre los procesos espinosos vertebrales de ocho a undécimo. Mueva a la rata bajo un microscopio quirúrgico, y disecciona y separe los músculos paraspinales lateralmente de los procesos espinosos hacia las facetas de las vértebras T-9 y T-10 en ambos lados. Deshabilitar la columna vertebral con un soporte estabilizador modificado, hacer una hendidura en ambos lados del hueso vertebral lateral, y deslizar los brazos de acero inoxidable del soporte bajo las facetas transversales del proceso expuestas.
Apriete los tornillos para fijar el soporte y utilice un transportador para exponer los procesos de láminas vertebrales y espinosas T-8 a 11. Usando un rongeur, aleje el proceso espinoso T-9, y retire una pequeña porción de la lámina, izquierda a la línea media y toda la parte derecha de la lámina, de la forma más lateral posible. A continuación, inserte el ronguer suavemente debajo de la lámina, y cortar un pequeño pedazo de hueso a la vez, hasta que se complete la región deseada de laminectomía.
A continuación, identifique la línea media dorsal del acorde espinal e inserte una aguja del calibre 30 verticalmente a través de la línea media, en el acorde espinal, hasta la pared ventral del canal vertebral, con el bisel hacia la derecha. Detenga cualquier sangrado con un pequeño trozo de espuma de gel estéril e inserte una punta de un par de tijeras de microcirugía de iridectomía a través de la línea media de la pista de la aguja, y la otra punta a lo largo de la superficie lateral del hemichord derecho, para hacer un corte completo en el hemichord derecho. Utilice el borde lateral de la misma aguja que un cuchillo, para cortar a través de la brecha de la lesión para confirmar una hemisección derecha completa.
Y visualizar la parte inferior del canal vertebral, para verificar la integridad de la hemiseción correcta. Utilice la mezcla de cemento para construir el puente estrecho sobre la esponja, y los procesos espinosos T-8 y T-10. Luego, sutura las capas musculares y de la piel por separado con hilo de seda 4/0, e inyecta 0.9%salina estéril por vía subcutánea para mantener la hidratación.
Presionar la vejiga urinaria de dos a tres veces al día durante la primera semana, y de una a dos veces en las semanas siguientes, hasta que vuelva el vaciado espontáneo de la vejiga. En los momentos experimentales apropiados después del procedimiento, coloque la rata adulta en un experimento de campo abierto y examine la locomoción del animal durante cuatro minutos. Usando la tabla, asigne un valor de 1 para sí' y 0 para no'for cada categoría de comportamiento y sume el valor total para dar una puntuación de paso de hemisección unilateral final de 0-8.
Para el análisis de acoplamiento de compuerta, registre el animal experimental que camina en un dispositivo de pista estrecha y asigne una puntuación de 0 para no'1 para regular'y/o torpe'y 2 para normal'para cada categoría de acoplamiento. Para la evaluación de la colocación de contactos, sostenga al animal en una posición vertical, de modo que ambas extremidades posteriores estén disponibles para la respuesta de colocación, y cepille la superficie dorsal de una extremidad posterior ligeramente hacia adelante hacia el borde de una superficie. Observe la colocación del pie en la superficie, y asigne una puntuación de colocación de contacto de la extremidad trasera de 0 para ninguna colocación'y 1 para la colocación'Para la evaluación de caminar por la cuadrícula, coloque la rata en una rejilla de malla de alambre recubierta de plástico de treinta por treinta por treinta centímetros con aberturas cuadradas de 3 cm, y grabe por video a la rata caminando libremente a través de la plataforma durante 30 pasos para permitir la cuantificación del número de pasos en falso del pie para cada extremidad para determinar la gravedad del motor.
La tinción fluorescente de un retójar en el epicentro de la lesión muestra una pérdida completa del hemichord derecho. Y la preservación del hemichord izquierdo contralateral a la lesión. Las puntuaciones de las medidas de evaluación de puertas individuales se pueden analizar por separado, o se pueden combinar en un comportamiento combinado compuesto después de la puntuación de hemiseción.
En los primeros tres días después de la lesión, las ratas pierden la capacidad de pisar, con movimientos escalonados que comienzan a reaparecer en el lado ipsilesional a los 7 10 días después de la lesión. Y con la mayoría de los pasos son pasos dorsales. A los 28 días de la hemigración T-9, las ratas pueden tomar medidas plantares con una coordinación prácticamente normal.
En comparación, la extremidad posterior contralesional se interrumpe menos con la puntuación unilateral de hemiseción cayendo dentro de los primeros cinco días después de la lesión, y volviendo a la línea de base para el día 10, después de la lesión. Para la prueba de acoplamiento total de compuerta, tanto la estabilidad como la adaptabilidad de la coordinación después de la hemisectación, se reducen notablemente durante los primeros cinco días después de la lesión. La colocación de contactos y la caminata por la rejilla de la extremidad posterior ipsilateral también se ven afectadas, generalmente recuperándose cuando el animal comienza a tomar pasos plantares.
Puede ser difícil producir una lesión de corte limpio. Colocar una aguja en el medio puede ser una guía útil para asegurar una separación completa del tejido.
