Ensamblaje modular basado en CRISPR para la construcción de alto rendimiento de una biblioteca de plásmidos UAS-cDNA/ORF

El cribado genómico funcional ofrece un potente enfoque para sondear la función de los genes y se basa en la construcción de bibliotecas de plásmidos de todo el genoma. Los enfoques convencionales para la construcción de bibliotecas de plásmidos requieren mucho tiempo y son laboriosos. Para abordar esta pregunta, desarrollamos un método simple y eficiente, el ensamblaje modular basado en CRISPR, o CRISPRmass.

A través de la escisión de secuencias vectoriales compartidas de ADNc o plásmido ORF por CRISPR/Cas9 y la posterior inserción de módulos UAS por ensamblaje adyacente, el procedimiento de construcción de una biblioteca de plásmidos de todo el genoma por CRISPRmass se estandariza como reacciones de probeta de dos pasos masivamente paralelas antes de la transformación bacteriana. CRISPRmass permite la construcción sencilla, rápida, eficiente y rentable de varias bibliotecas de plásmidos. También se puede aplicar a la edición de varias bibliotecas de plásmidos de todo el genoma en general, y es una alternativa a la tecnología de puerta de enlace en la edición de bibliotecas de plásmidos de alto rendimiento, allanando el camino para los estudios globales de redes biológicas.