Assessing Two-dimensional Crystallization Trials of Small Membrane Proteins for Structural Biology Studies by Electron Crystallography

Electron crystallography has evolved as a method that can be used either alternatively or in combination with three-dimensional crystallization and X-ray ...

The Peel-Blot Technique: A Cryo-EM Sample Preparation Method to Separate Single Layers From Multi-Layered or Concentrated Biological Samples

The peel-blot cryo-EM grid preparation technique is a significantly modified back-injection method with the objective of achieving a reduction in layers ...

Georgia Institute of Technology

Genentech

&#x6211;&#x4EEC;&#x8BA4;&#x4E3A;&#xFF0C;&#x5728;&#x6C38;&#x6052;&#x7684;&#x666F;&#x89C2;&#xFF0C;&#x901A;&#x80C0;&#x7684;&#x80CC;&#x666F;&#x4E0B;&#x4F5C;&#x51FA;&#x9884;&#x8A00;&#x5B87;&#x5B99; &mdash; &mdash; &#x5E76;&#x4E14;&#x53EF;&#x80FD;&#x662F;&#x7C92;&#x5B50;&#x7269;&#x7406;---&#x53EF;&#x89C2;&#x6D4B;&#x5BF9;&#x8C61;&#x9700;&#x8981;&#x800C;&#x4E0D;&#x662F;&#x5BF9;&#x81EA;&#x5DF1;&#x8FDB;&#x884C;&#x771F;&#x7A7A;&#x84B8;&#x998F;&#x4E00;&#x53EF;&#x80FD;&#x7684;&#x5B87;&#x5B99;&#x5386;&#x53F2;&#x4E0A;&#x7684;&#x4E00;&#x9879;&#x63AA;&#x65BD;&#x3002;&#x5982;&#x679C;&#x51FA;&#x73B0;&#x91CD;&#x5927;&#x6162;&#x6EDA;&#x901A;&#x80C0;&#xFF0C;&#x53EF;&#x89C2;&#x6D4B;&#x5BF9;&#x8C61;&#x662F;&#x4E00;&#x822C;&#x7531;&#x5386;&#x53F2;&#x540E;&#x786E;&#x5B9A;&#x6700;&#x540E;&#x8FC7;&#x6E21;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7A33;&#x8FDB;&#x884C;&#x771F;&#x7A7A;&#x84B8;&#x998F;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x4ECE;&#x51E0;&#x4E2A;&#x73B0;&#x6709;&#x7684;&#x63AA;&#x65BD;&#xFF0C;&#x4E3A;&#x8BA1;&#x6570;&#x8FDB;&#x884C;&#x771F;&#x7A7A;&#x84B8;&#x998F;&#x542F;&#x52A8;&#x548C;&#x5F00;&#x53D1;&#x8BA1;&#x6570;&#x8FDB;&#x884C;&#x771F;&#x7A7A;&#x84B8;&#x998F;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x8FC7;&#x6E21;&#x63AA;&#x65BD;&#x3002;

&#x5173;&#x4E8E;&#x5B87;&#x5B99;&#x6C38;&#x6052;&#x901A;&#x80C0;&#x4ECE;&#x8F6C;&#x6362;&#x7684;&#x63AA;&#x65BD;&#x3002;

We argue that, in the context of eternal inflation in the landscape, making predictions for cosmological--and possibly particle physics--observables requires a measure on the possible cosmological histories as opposed to one on the vacua themselves. If significant slow-roll inflation occurs, the observables are generally determined by the history after the last transition between metastable vacua. Hence, we start from several existing measures for counting vacua and develop measures for counting the transitions between vacua.

Measures on transitions for cosmology from eternal inflation.

Nous font valoir que, dans le contexte d&#39;inflation &eacute;ternelle dans le paysage, faire des pr&eacute;dictions cosmologique--et &eacute;ventuellement la physique des particules--observables n&eacute;cessite une mesure sur les histoires cosmologiques possibles par opposition &agrave; une sur le vide eux-m&ecirc;mes. En cas d&#39;importante inflation lente-roll, les observables sont g&eacute;n&eacute;ralement d&eacute;termin&eacute;s par l&#39;histoire apr&egrave;s la derni&egrave;re transition entre vide m&eacute;tastable. C&#39;est pourquoi, nous commen&ccedil;ons de plusieurs mesures existantes pour le comptage de vide et &eacute;laborer des mesures pour compter les transitions entre vide.

Mesures sur les transitions pour la cosmologie de l&#39;inflation &eacute;ternelle.

Wir behaupten, dass, im Rahmen der ewige Inflation in der Landschaft, Vorhersagen f&uuml;r kosmologische-- und m&ouml;glicherweise Teilchenphysik--Observablen erfordert eine Ma&szlig;nahme auf die m&ouml;glichen kosmologischen Geschichten im Gegensatz zu einer auf die Vakua selbst. Tritt bedeutende verlangsamen-Roll-Inflation, die Observablen im Allgemeinen die Geschichte nach dem letzten &Uuml;bergang zwischen metastabile Vakua bestimmt. Daher wir Reihe von bestehenden F&ouml;rderma&szlig;nahmen f&uuml;r die Z&auml;hlung Vakua beginnen und Entwicklung von Ma&szlig;nahmen f&uuml;r die &Uuml;berg&auml;nge zwischen Vakua z&auml;hlen.

Ma&szlig;nahmen auf &Uuml;berg&auml;nge f&uuml;r Kosmologie von ewige Inflation.

Ci sostengono che, nel contesto dell&#39;inflazione eterna nel paesaggio, fare previsioni cosmologico - e possibilmente particella fisica - osservabili richiede una misura su storie cosmologiche possibili rispetto a uno sulla vacua stessi. Se significativo lento-roll inflazione si verifica, le osservabili sono generalmente determinate dalla storia dopo l&#39;ultima transizione tra vacua metastabile. Dunque, iniziamo da diverse misure esistenti per il conteggio vacua e sviluppare misure per contare le transizioni tra vacua.

Misure su transizioni per la cosmologia da inflazione eterna.

&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3001;&#x6C38;&#x9060;&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D5;&#x30EC;&#x3001;&#x98A8;&#x666F;&#x306E;&#x4E2D;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C6;&#x30AD;&#x30B9;&#x30C8;&#x3067;&#x5B87;&#x5B99;&#x8AD6;&#x7684;--&#x306E;&#x4E88;&#x6E2C;&#x3092;&#x4F5C;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x4E3B;&#x5F35;&#x3059;&#x308B;&#x304A;&#x305D;&#x3089;&#x304F;&#x6975;&#x91CF;&#x7D20;&#x7C92;&#x5B50;&#x7269;&#x7406;&#x5B66; &#x2015; &#x2015; &#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x5B87;&#x5B99;&#x8AD6;&#x7684;&#x5C65;&#x6B74; vacua &#x81EA;&#x8EAB;&#x306E;&#x3082;&#x306E;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x30E1;&#x30B8;&#x30E3;&#x30FC;&#x3002;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x4F4E;&#x901F;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB; &#x30A4;&#x30F3;&#x30D5;&#x30EC;&#x304C;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x305F;&#x5834;&#x5408;&#x306F;&#x3001;&#x6975;&#x91CF;&#x306F;&#x6E96;&#x5B89;&#x5B9A; vacua &#x9593;&#x306E;&#x6700;&#x5F8C;&#x306E;&#x9077;&#x79FB;&#x5F8C;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306B;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6B74;&#x53F2;&#x304C;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;vacua &#x3092;&#x6570;&#x3048;&#x308B;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x65E2;&#x5B58;&#x306E;&#x5BFE;&#x7B56;&#x304B;&#x3089;&#x958B;&#x59CB;&#x3057;&#x3001;vacua &#x9593;&#x306E;&#x9077;&#x79FB;&#x3092;&#x6570;&#x3048;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x63AA;&#x7F6E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x5B87;&#x5B99;&#x8AD6;&#x6C38;&#x9060;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D5;&#x30EC;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x9077;&#x79FB;&#x306B;&#x95A2;&#x3059;&#x308B;&#x63AA;&#x7F6E;

&#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB17C;&#xC7C1;, &#xD48D;&#xACBD;, &#xC601;&#xC6D0;&#xD55C; &#xC778;&#xD50C;&#xB808;&#xC774;&#xC158;&#xC758; &#xB9E5;&#xB77D;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xC8FC;-&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC608;&#xCE21;&#xC744; &#xB9CC;&#xB4DC;&#xB294; &#xD558; &#xACE0; &#xAC00;&#xB2A5; &#xD558; &#xAC8C; &#xC785;&#xC790; &#xBB3C;&#xB9AC;&#xD559;-&#xAD00;&#xCC30; &#xAC00;&#xB2A5; &#xAC1C;&#xCCB4; &#xD544;&#xC694; vacua &#xC790;&#xC2E0;&#xC5D0; &#xBC18;&#xB300; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xBA87;&#xBA87; &#xC5ED;&#xC0AC;&#xC5D0; &#xCE21;&#xC815;. &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xB290;&#xB9B0; &#xB864; &#xC778;&#xD50C;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xACBD;&#xC6B0;&#xB294; &#xAD00;&#xCC30; &#xAC00;&#xB2A5; &#xAC1C;&#xCCB4; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9; &#xD655;&#xC815; vacua &#xC804;&#xD658; &#xD6C4; &#xC5ED;&#xC0AC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xACB0;&#xC815; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xC6B0;&#xB9AC; vacua &#xACC4;&#xC0B0;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xAC00;&#xC9C0; &#xAE30;&#xC874; &#xB300;&#xCC45;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2DC;&#xC791; &#xD558; &#xACE0; &#xACC4;&#xC0B0; vacua &#xAC04;&#xC758; &#xC804;&#xD658;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB300;&#xCC45;&#xC744; &#xAC1C;&#xBC1C;.

&#xC601;&#xC6D0;&#xD55C; &#xC778;&#xD50C;&#xB808;&#xC774;&#xC158;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xC8FC;&#xB860;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC804;&#xD658;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB300;&#xCC45;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Nosotros sostenemos que, en el contexto de inflaci&oacute;n eterna en el paisaje, hacer predicciones cosmol&oacute;gica--y posiblemente f&iacute;sica de la part&iacute;cula--observables requiere una medida sobre las posibles historias cosmol&oacute;gicas frente a uno en la vacua ellos mismos. Si se produce una inflaci&oacute;n significativa lento-roll, los observables generalmente dependen de la historia despu&eacute;s de la &uacute;ltima transici&oacute;n entre metaestable vacua. Por lo tanto, partimos desde varias medidas existentes para contar vacua y desarrollar medidas para contar las transiciones entre vacua.

Medidas en las transiciones para la cosmolog&iacute;a de inflaci&oacute;n eterna.

&#x4E2D;&#x548C;&#x75C5;&#x6BD2;&#x4ECD;&#x7136;&#x5728;&#x52A8;&#x7269;&#x5929;&#x82B1;&#x6A21;&#x578B;&#x6CA1;&#x6709;&#x5929;&#x82B1;&#x75AB;&#x82D7;&#x7597;&#x6548;&#x8BC4;&#x4F30;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x5DE5;&#x5177;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x65B9;&#x9762;&#xFF0C;&#x53D1;&#x5C55;&#x7684;&#x4E00;&#x79CD;&#x5FEB;&#x901F;&#x3001; &#x654F;&#x611F;&#x548C;&#x9AD8;&#x541E;&#x5410;&#x91CF;&#x75D8;&#x82D7;&#x5931;&#x6548;&#x68C0;&#x6D4B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x5DF2;&#x8BBE;&#x6CD5;&#x8BC4;&#x4EF7;&#x66FF;&#x4EE3;&#x5929;&#x82B1;&#x75AB;&#x82D7;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x7528;&#x6865;&#x63A5;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x4E86;&#x89E3;&#x6297;&#x75C5;&#x6BD2;&#x514D;&#x75AB;&#x6CBB;&#x7597;&#x5236;&#x5EA6;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x75D8;&#x82D7;&#x75C5;&#x6BD2;&#x4E2D;&#x548C;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x7A7A;&#x6591;&#x51CF;&#x5C11;&#x7684;&#x6700;&#x5E38;&#x7528;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x662F;&#x65F6;&#x95F4;&#x3001; &#x52B3;&#x52A8;&#x529B;&#x548C;&#x6750;&#x6599;&#x5BC6;&#x96C6;&#xFF0C;&#x56E0;&#x6B64;&#x9650;&#x5236;&#x5176;&#x5B9E;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x4E2D;&#x5BF9;&#x5927;&#x89C4;&#x6A21;&#x3001; &#x9AD8;&#x901A;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x3002;&#x6700;&#x65B0;&#x8FDB;&#x5C55;&#x63D0;&#x4F9B;&#x7684;&#x66FF;&#x4EE3;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x662F;&#x5C11;&#x52B3;&#x52A8;&#x5BC6;&#x96C6;&#x548C;&#x9AD8;&#x541E;&#x5410;&#x91CF;&#xFF0C;&#x4F46;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x8BD5;&#x5242;&#x548C;&#x6613;&#x7528;&#x6027;&#x7684;&#x9650;&#x5236;&#x3002;&#x521B;&#x65B0;&#x4E2D;&#x548C;&#x8BD5;&#x9A8C;&#x662F;&#x57FA;&#x4E8E;&#x8868;&#x8FBE;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D; (&#x897F;&#x94C1; GFP) &#x548C;&#x7C98;&#x9644;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5355;&#x5C42;&#x591A;&#x4E95;&#x677F;&#x683C;&#x5F0F;&#x7684;&#x6539;&#x8FDB;&#x897F;&#x90E8;&#x50A8;&#x5907;&#x75D8;&#x82D7;&#x77E2;&#x91CF;&#x6765;&#x63CF;&#x8FF0;&#x7684;&#x3002;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x662F;&#x5FEB;&#x901F;&#x3001; &#x51C6;&#x786E;&#x3001; &#x63D0;&#x4F9B;&#x52A8;&#x6001;&#x8303;&#x56F4;&#x5927;&#x548C;&#x975E;&#x5E38;&#x9002;&#x5408;&#x5927;&#x89C4;&#x6A21;&#x75AB;&#x82D7;&#x63A5;&#x79CD;&#x4F7F;&#x7528;&#x6807;&#x51C6;&#x8D34;&#x58C1;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7CFB;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;

&#x57FA;&#x4E8E;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x68C0;&#x6D4B;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x5929;&#x82B1;&#x75AB;&#x82D7;&#x7597;&#x6548;&#x8FC5;&#x901F;&#x3001; &#x9AD8;&#x541E;&#x5410;&#x91CF;&#x7684;&#x75D8;&#x82D7;&#x75C5;&#x6BD2;&#x4E2D;&#x548C;&#x8BD5;&#x9A8C;&#x3002;

Virus neutralization remains a vital tool in assessment of vaccine efficacy for smallpox in the absence of animal smallpox models. In this regard, development of a rapid, sensitive, and high-throughput vaccinia neutralization assay has been sought for evaluating alternative smallpox vaccines, use in bridging studies, as well as understanding the effects of anti-viral immunotherapeutic regimes. The most frequently used method of measuring vaccinia virus neutralization by plaque reduction is time, labor, and material intensive, and therefore limiting in its utility for large scale, high-throughput analysis. Recent advances provide alternative methods that are less labor intensive and higher throughput but with limitations in reagents needed and ease of use. An innovative neutralization assay is described based on a modified Western Reserve vaccinia vector expressing green fluorescent protein (WR-GFP) and an adherent cell monolayer in multi-well plate format. The assay is quick, accurate, provides a large dynamic range and is well suited for large-scale vaccination studies using standard adherent cell lines.

A rapid, high-throughput vaccinia virus neutralization assay for testing smallpox vaccine efficacy based on detection of green fluorescent protein.

Neutralisation du virus demeure un instrument essentiel dans l&#39;&eacute;valuation de l&#39;efficacit&eacute; du vaccin contre la variole en l&#39;absence de mod&egrave;les animaux de la variole. &Agrave; cet &eacute;gard, mise au point d&#39;un test de neutralisation rapide, sensible et haut d&eacute;bit Vaccine a &eacute;t&eacute; sollicit&eacute;e pour l&#39;&eacute;valuation de vaccins contre la variole alternatifs, servir &agrave; combler des &eacute;tudes, mais aussi de comprendre les effets des r&eacute;gimes immunoth&eacute;rapeutiques anti-virales. La m&eacute;thode le plus souvent utilis&eacute;e de mesure de neutralisation du virus vaccine par r&eacute;duction de la plaque est temps, travail et mat&eacute;riel intensive et donc limitant dans son utilit&eacute; pour la grande &eacute;chelle, analyse de haut-d&eacute;bit. Les avanc&eacute;es r&eacute;centes fournissent des m&eacute;thodes alternatives moins d&eacute;bit intensif et plu de travail mais avec des limitations dans les r&eacute;actifs utilis&eacute;s et facilit&eacute; d&#39;utilisation. Un test de neutralisation novateur est d&eacute;crite bas&eacute;e sur un vecteur de Vaccine Western Reserve modifi&eacute; exprimant la prot&eacute;ine fluorescente verte (GFP-WR) et une monocouche de cellules adh&eacute;rentes au format plaque multipuits. Le test est rapide, pr&eacute;cis, propose une large gamme dynamique et est bien adapt&eacute; pour des &eacute;tudes de vaccination &agrave; grande &eacute;chelle utilisant des lign&eacute;es de cellules adh&eacute;rentes standard.

Un dosage de neutralisation du virus vaccine rapide et &agrave; haut d&eacute;bit pour tester l&#39;efficacit&eacute; du vaccin antivariolique bas&eacute;e sur la d&eacute;tection de la prot&eacute;ine fluorescente verte.

Virus Neutralisierung bleibt ein wichtiges Werkzeug in der Bewertung der Wirksamkeit der Impfstoff f&uuml;r Pocken keine tierischen Pocken-Modelle. In diesem Zusammenhang wurde Entwicklung eine schnelle, empfindliche und hohem Durchsatz des Vaccinia-Neutralisierung-Tests f&uuml;r die Bewertung alternativer Pockenimpfstoffen, Einsatz in &Uuml;berbr&uuml;ckung Studien sowie das Verst&auml;ndnis der Auswirkungen der antiviralen immuntherapeutischen Regime gesucht. Die am h&auml;ufigsten verwendete Methode zur Messung des Vaccinia Virus Neutralisierung durch Verringerung der Plakette ist Zeit, Arbeit und Material, intensive und daher Begrenzung in ihre N&uuml;tzlichkeit f&uuml;r gro&szlig; angelegte, Hochdurchsatz-Analyse. J&uuml;ngste Fortschritte bieten alternative Methoden, die weniger Arbeit intensiv und h&ouml;herer Durchsatz aber mit Einschr&auml;nkungen in Reagenzien ben&ouml;tigt und Benutzerfreundlichkeit sind. Ein innovativer Neutralisierung-Assay wird basierend auf einen modifizierten Western Reserve &quot;Vaccinia&quot; Vektor gr&uuml;n fluoreszierendes Protein (WR-GFP) und eine Monolage adh&auml;rente Zellen in multi-well Plattenformat Ausdr&uuml;cken beschrieben. Dieser Test ist schnell, pr&auml;zise, bietet einen gro&szlig;en Dynamikbereich und eignet sich gut f&uuml;r gro&szlig;angelegte Impfung Studien mit Norm adh&auml;renten Zelllinien.

Eine schnelle, Hoch-Durchsatz des Vaccinia Virus Neutralisierung Assay f&uuml;r Tests Pocken-Impfstoff Wirksamkeit basiert auf dem Nachweis des gr&uuml;n fluoreszierenden Proteins.

Neutralizzazione del virus rimane uno strumento vitale nella valutazione dell&#39;efficacia del vaccino per vaiolo in assenza di modelli animali di vaiolo. A questo proposito, lo sviluppo di un test di neutralizzazione rapida, sensibile e high-throughput vaccinia virus sia stato richiesto per la valutazione di vaccini antivaiolo alternativi, uso in bridging studies, come pure di comprendere gli effetti dei regimi immunotherapeutic anti-virali. Il metodo pi&ugrave; frequentemente usato di neutralizzazione del virus vaccinia di misura di riduzione di placca &egrave; tempo, manodopera e materiale, intensivo e quindi limitante nella sua utilit&agrave; per la grande scala, analisi di alto-rendimento. I recenti progressi forniscono metodi alternativi che sono meno throughput di lavoro intensivo e superiore, ma con limitazioni in reagenti necessari e facilit&agrave; d&#39;uso. Un test di neutralizzazione innovativo &egrave; descritto basato su un vettore di vaccinia Western Reserve modificato che esprimono la proteina fluorescente verde (GFP-WR) e un monostrato di cellule aderenti in formato piastra piastre multi-pozzetto. Il dosaggio &egrave; rapido, preciso, fornisce un&#39;ampia gamma dinamica ed &egrave; adatto per gli studi di vaccinazione su larga scala utilizzando linee cellulari aderenti standard.

Un dosaggio di neutralizzazione virus di vaccinia rapid, high-throughput per l&#39;efficacia del vaccino antivaiolo test basato sulla rilevazione della proteina fluorescente verde.

&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x4E2D;&#x548C;&#x52D5;&#x7269;&#x5929;&#x7136;&#x75D8;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306E;&#x4E0D;&#x5728;&#x3067;&#x5929;&#x7136;&#x75D8;&#x306E;&#x30EF;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x6709;&#x52B9;&#x6027;&#x306E;&#x8A55;&#x4FA1;&#x306B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x306A;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x307E;&#x307E;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x70B9;&#x306F;&#x3001;&#x6025;&#x901F;&#x306A;&#x6A5F;&#x5BC6;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x9AD8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30C3;&#x30C8; &#x30EF;&#x30AF;&#x30B7;&#x30CB;&#x30A2;&#x4E2D;&#x548C;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x7814;&#x7A76;&#x3001;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30B8;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x6297;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x514D;&#x75AB;&#x7642;&#x6CD5;&#x30EC;&#x30B8;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x7406;&#x89E3;&#x3067;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x4EE3;&#x66FF;&#x5929;&#x7136;&#x75D8;&#x30EF;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x8A55;&#x4FA1;&#x306B;&#x6C42;&#x3081;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x304D;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30EF;&#x30AF;&#x30B7;&#x30CB;&#x30A2; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x4E2D;&#x548C;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30D7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30AF;&#x9664;&#x53BB;&#x306E;&#x6700;&#x3082;&#x983B;&#x7E41;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x306F;&#x3001;&#x6642;&#x9593;&#x3001;&#x52B4;&#x50CD;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5927;&#x898F;&#x6A21;&#x3001;&#x9AD8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30C3;&#x30C8;&#x5206;&#x6790;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6750;&#x6599;&#x96C6;&#x4E2D;&#x7684;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3001;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x305D;&#x306E;&#x30E6;&#x30FC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30EA;&#x30C6;&#x30A3;&#x306E;&#x5236;&#x9650;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;&#x9032;&#x6B69;&#x4EE5;&#x4E0B;&#x306E;&#x52B4;&#x50CD;&#x96C6;&#x7D04;&#x578B;&#x3068;&#x9AD8;&#x3044;&#x30B9;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30C3;&#x30C8;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x8A66;&#x85AC;&#x3068;&#x4F7F;&#x3044;&#x3084;&#x3059;&#x3055;&#x306E;&#x5236;&#x9650;&#x4E8B;&#x9805;&#x3067;&#x3059;&#x4EE3;&#x66FF;&#x306E;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x9769;&#x65B0;&#x7684;&#x306A;&#x4E2D;&#x548C;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x7DD1;&#x8272;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; (GFP-WR&#xFF09; &#x3068;&#x3001;&#x4ED8;&#x7740;&#x6027;&#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x5358;&#x4E00;&#x5C64;&#x30A6;&#x30A7;&#x30EB; &#x30D7;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8; &#x30B5;&#x30A4;&#x30BA;&#x306E;&#x5F62;&#x5F0F;&#x3067;&#x8868;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x5909;&#x66F4;&#x30A6;&#x30A7;&#x30B9;&#x30BF;&#x30F3; &#x30EA;&#x30B6;&#x30FC;&#x30D6; &#x30EF;&#x30AF;&#x30B7;&#x30CB;&#x30A2; &#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8A66;&#x91D1;&#x306F;&#x901F;&#x304F;&#x3001;&#x6B63;&#x78BA;&#x306A;&#x5E83;&#x3044;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30C3;&#x30AF; &#x30EC;&#x30F3;&#x30B8;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3001;&#x6A19;&#x6E96;&#x4ED8;&#x7740;&#x6027;&#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x5927;&#x898F;&#x6A21;&#x306A;&#x30EF;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x9069;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x6025;&#x901F;&#x306B;&#x3001;&#x9AD8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30C3;&#x30C8; &#x30EF;&#x30AF;&#x30B7;&#x30CB;&#x30A2; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x4E2D;&#x548C;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x7528;&#x7DD1;&#x8272;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x691C;&#x51FA;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x304F;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x306E;&#x5929;&#x7136;&#x75D8;&#x30EF;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x6709;&#x52B9;&#x6027;&#x306F;&#x3002;

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&#xB179;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xAC80;&#xCD9C;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xCC9C;&#xC5F0;&#xB450; &#xBC31;&#xC2E0; &#xD6A8;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC2E0;&#xC18D; &#xD558; &#xACE0; &#xB192;&#xC740; &#xCC98;&#xB9AC;&#xB7C9; vaccinia &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC911;&#xD654; &#xC2DC;&#xD5D8;.

Neutralizaci&oacute;n de virus sigue siendo un instrumento vital en la evaluaci&oacute;n de la eficacia de la vacuna contra la viruela en la ausencia de modelos animales de la viruela. En este sentido, se ha buscado desarrollo de un ensayo de neutralizaci&oacute;n de vaccinia r&aacute;pido, sensible y de alto rendimiento para la evaluaci&oacute;n de vacunas viruela alternativos, uso en estudios de puente, as&iacute; como comprender los efectos de los reg&iacute;menes inmunoterap&eacute;uticos antivirales. El m&eacute;todo m&aacute;s frecuente de medici&oacute;n neutralizaci&oacute;n de virus vaccinia por reducci&oacute;n de placa es tiempo, mano de obra y material intensivo y por lo tanto limitando en su utilidad para el an&aacute;lisis de alto rendimiento a gran escala. Los avances recientes proporcionan m&eacute;todos alternativos que son menos mano de obra intensiva y mayor rendimiento, pero con limitaciones en reactivos necesitados y facilidad de uso. Un ensayo de neutralizaci&oacute;n innovador se describe en un vector de vaccinia modificado de Western Reserve expresando la prote&iacute;na verde fluorescente (GFP-WR) y una monocapa de c&eacute;lulas adherentes en formato multipocillo placa base. El ensayo es r&aacute;pido, exacto, proporciona un amplio rango din&aacute;mico y es ideal para estudios de vacunaci&oacute;n a gran escala utilizando l&iacute;neas celulares adherentes est&aacute;ndar.

Un an&aacute;lisis r&aacute;pido, alto rendimiento vaccinia virus neutralizaci&oacute;n para prueba eficacia de la vacuna de la viruela que se basa en la detecci&oacute;n de la prote&iacute;na verde fluorescente.

&#x7F20;&#x6270;&#x884C;&#x4E3A;&#x7684;&#x53D7;&#x5BB3;&#x8005;&#x5F80;&#x5F80;&#x9047;&#x5230;&#x4E00;&#x4E9B;&#x8D1F;&#x9762;&#x7684;&#x5FC3;&#x7406;&#x95EE;&#x9898;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x6050;&#x60E7;&#x3001; &#x75C7;&#x72B6;&#x7684;&#x538B;&#x6291;&#x548C;&#x6124;&#x6012;&#x7684;&#x4E8B;&#x60C5;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x5BFC;&#x81F4;&#x8FD9;&#x79CD;&#x7ED3;&#x679C;&#x7684;&#x56E0;&#x7D20;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x662F;&#x6709;&#x9650;&#x7684;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#x662F;&#x5148;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E0D;&#x540C;&#x5B50;&#x7FA4;&#x7684;&#x8DDF;&#x8E2A;&#x53D7;&#x5BB3;&#x4EBA;&#x57FA;&#x4E8E;&#x6B63;&#x5728;&#x5927;&#x8E0F;&#x6B65;&#x8D70;&#x6240;&#x5F15;&#x8D77;&#x7684;&#x5FC3;&#x7406;&#x95EE;&#x9898;&#x7684;&#x63AA;&#x65BD;&#x3002;&#x4E00;&#x65E6;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E86;&#x4E0B;, &#x4E00;&#x6B65;&#x662F;&#x5BA1;&#x67E5;&#x5C0F;&#x7EC4;&#x6210;&#x5458;&#x7684;&#x6982;&#x7387;&#x5BF9;&#x4EBA;&#x53E3;&#x548C;&#x8DDF;&#x8E2A;&#x76F8;&#x5173;&#x53D8;&#x91CF;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x7ED3;&#x679C;&#x663E;&#x793A;&#x53D7;&#x8BBF;&#x8005;&#x662F;&#x5973;&#x6027;&#x3001; &#x7F20;&#x6270;&#x8005;&#x4E0E;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x4E86;&#x4E8B;&#x5148;&#x7684;&#x5173;&#x7CFB;&#x3001; &#x7ECF;&#x5386;&#x4E86;&#x5404;&#x79CD;&#x5404;&#x6837;&#x7684;&#x8DDF;&#x8E2A;&#x884C;&#x4E3A;&#x3001; &#x79BB;&#x5A5A;/&#x5931;&#x6563;&#x5206;&#x79BB;&#xFF0C;&#x548C;&#x62A5;&#x544A;&#x63A5;&#x53D7;&#x653F;&#x5E9C;&#x63F4;&#x52A9;&#x66F4;&#x6709;&#x53EF;&#x80FD;&#x5206;&#x4E3A;&#x5B50;&#x7FA4;&#x7684;&#x7ECF;&#x5386;&#x591A;&#x4E2A;&#x8D1F;&#x9762;&#x7ED3;&#x679C;&#x7684;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x9AD8;&#x7684;&#x7279;&#x70B9;&#x3002;

&#x786E;&#x5B9A;&#x8DDF;&#x8E2A;&#x53D7;&#x5BB3;&#x7684;&#x4E0D;&#x826F;&#x5FC3;&#x7406;&#x53CD;&#x5E94;&#x7684;&#x9884;&#x6D4B;&#x3002;

Victims of stalking often experience a number of negative psychological problems including such things as fear, symptoms of depression, and anger. However, research on factors that lead to these outcomes is limited. The goal of this study was to first identify distinct subgroups of stalking victims based on measures of psychological problems resulting from being stalked. Once identified, the next step was to examine the influence of demographic and stalking-related variables on the probability of subgroup membership. The results revealed that respondents who were female, had a prior relationship with the stalker, experienced a greater variety of stalking behaviors, were divorced/separated, and reported receiving government assistance were more likely to be classified into subgroups characterized by a high probability of experiencing multiple negative outcomes.

Identifying predictors of negative psychological reactions to stalking victimization.

Victimes de harc&egrave;lement criminel &eacute;prouvent souvent un certain nombre de probl&egrave;mes psychologiques n&eacute;gatifs, y compris des choses telles que la peur, les sympt&ocirc;mes de d&eacute;pression et de col&egrave;re. Toutefois, les recherches sur les facteurs qui m&egrave;nent &agrave; ces r&eacute;sultats sont limit&eacute;e. L&#39;objectif de cette &eacute;tude &eacute;tait d&#39;abord identifier des sous-groupes distincts des victimes de harc&egrave;lement criminel bas&eacute;s sur les mesures des probl&egrave;mes psychologiques r&eacute;sultant de traqu&eacute;es. Une fois identifi&eacute;s, l&#39;&eacute;tape suivante consistait &agrave; examiner l&#39;influence des variables d&eacute;mographiques et harc&egrave;lement criminel sur la probabilit&eacute; des membres du sous-groupe. Les r&eacute;sultats ont r&eacute;v&eacute;l&eacute; que les r&eacute;pondants &eacute;taient des femmes, avaient une relation ant&eacute;rieure avec le harceleur, a connu une plus grande vari&eacute;t&eacute; de comportements de harc&egrave;lement criminel, ont &eacute;t&eacute; divorc&eacute;s/s&eacute;par&eacute;s et ont indiqu&eacute; avoir re&ccedil;u de l&#39;aide gouvernementale &eacute;taient plus susceptibles d&#39;&ecirc;tre class&eacute;s en sous-groupes, caract&eacute;ris&eacute;s par une forte probabilit&eacute; de vivre de multiples cons&eacute;quences n&eacute;fastes.

Identification des facteurs pr&eacute;dictifs des r&eacute;actions psychologiques n&eacute;gatives &agrave; la traque de victimisation.

Opfer von stalking erleben oft eine Reihe von negativen psychologischen Problemen, einschlie&szlig;lich solche Sachen wie Angst, Symptome der Depression und Wut. Forschung &uuml;ber Faktoren, die zu diesen Ergebnissen f&uuml;hren ist jedoch begrenzt. Das Ziel dieser Studie bestand darin zun&auml;chst verschiedene Untergruppen von stalking Opfer auf der Grundlage von Ma&szlig;nahmen der psychologischen Probleme, die aus wird gestielt. Einmal identifiziert, war der n&auml;chste Schritt, den Einfluss der demografischen und stalking-bezogenen Variablen auf die Wahrscheinlichkeit der Untergruppe Zugeh&ouml;rigkeit zu pr&uuml;fen. Die Ergebnisse ergab, dass Befragten waren weiblich, hatte eine vorherige Beziehung mit der Stalker, erlebt eine gr&ouml;&szlig;ere Vielfalt von schleichender Verhaltensweisen wurden geschieden/getrennt und berichtete entsch&auml;digte Regierung eher in Untergruppen zeichnet sich durch eine hohe Wahrscheinlichkeit erleben mehrere negative Ergebnisse unterteilt werden.

Pr&auml;diktoren f&uuml;r negative psychische Reaktionen auf schleichender Viktimisierung zu ermitteln.

Le vittime di stalking spesso sperimentare un certo numero di problemi psicologici negativi, compreso tali cose come la paura, i sintomi della depressione e rabbia. Tuttavia, la ricerca sui fattori che portano a questi risultati &egrave; limitata. L&#39;obiettivo di questo studio &egrave; stato in primo luogo identificare sottogruppi distinti di vittime di stalking basate su misure di problemi psicologici derivanti dall&#39;essere pedinato. Una volta identificato, il passo successivo &egrave; stato di esaminare l&#39;influenza delle variabili demografiche e stalking-correlati alla probabilit&agrave; di appartenenza di sottogruppo. I risultati hanno rivelato che intervistati erano femminili, ha avuto una relazione precedente con stalker, sperimentato una maggiore variet&agrave; di comportamenti di stalking, erano divorziati/separati e segnalato di avere ricevuto assistenza di governo avevano pi&ugrave; probabili di essere classificati in sottogruppi caratterizzati da un&#39;alta probabilit&agrave; di sperimentare molteplici esiti negativi.

Identificazione dei predittori di reazioni psicologiche negative alla vittimizzazione stalking.

&#x30B9;&#x30C8;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x306E;&#x88AB;&#x5BB3;&#x8005;&#x306F;&#x3057;&#x3070;&#x3057;&#x3070;&#x6050;&#x308C;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x3001;&#x3046;&#x3064;&#x75C5;&#x3068;&#x6012;&#x308A;&#x306E;&#x75C7;&#x72B6;&#x306A;&#x3069;&#x5426;&#x5B9A;&#x7684;&#x306A;&#x5FC3;&#x7406;&#x7684;&#x306A;&#x554F;&#x984C;&#x306E;&#x6570;&#x3092;&#x7D4C;&#x9A13;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x6210;&#x679C;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B;&#x8981;&#x56E0;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x9650;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x76EE;&#x6A19;&#x306F;&#x3001;&#x6700;&#x521D;&#x306B;&#x30B9;&#x30C8;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x751F;&#x3058;&#x308B;&#x5FC3;&#x7406;&#x7684;&#x306A;&#x554F;&#x984C;&#x306E;&#x5BFE;&#x7B56;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x304F;&#x30B9;&#x30C8;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x88AB;&#x5BB3;&#x8005;&#x306E;&#x500B;&#x5225;&#x30B5;&#x30D6;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4E00;&#x5EA6;&#x8B58;&#x5225;&#x3001;&#x6B21;&#x306E;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x306F;&#x30B5;&#x30D6;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306E;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#x30B7;&#x30C3;&#x30D7;&#x306E;&#x78BA;&#x7387;&#x306E;&#x4EBA;&#x53E3;&#x7D71;&#x8A08;&#x3068;&#x30B9;&#x30C8;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x95A2;&#x9023;&#x5909;&#x6570;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x56DE;&#x7B54;&#x8005;&#x304C;&#x5973;&#x6027;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3001;&#x30B9;&#x30C8;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x3068;&#x306E;&#x4E8B;&#x524D;&#x306E;&#x95A2;&#x4FC2;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3001;&#x30B9;&#x30C8;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC; &#x30D3;&#x30D8;&#x30A4;&#x30D3;&#x30A2;&#x30FC;&#x3088;&#x308A;&#x591A;&#x69D8;&#x306A;&#x7D4C;&#x9A13;&#x3001;&#x96E2;&#x5A5A;/&#x5206;&#x96E2;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3068;&#x653F;&#x5E9C;&#x306E;&#x63F4;&#x52A9;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x53D6;&#x3063;&#x305F;&#x3068;&#x5831;&#x544A;&#x304C;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x5426;&#x5B9A;&#x7684;&#x306A;&#x7D50;&#x679C;&#x3092;&#x7D4C;&#x9A13;&#x3057;&#x3066;&#x306E;&#x9AD8;&#x78BA;&#x7387;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7279;&#x5FB4;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x30B5;&#x30D6;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306B;&#x5206;&#x985E;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x9AD8;&#x3044;&#x304C;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

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&#xC2A4;&#xD1A0;&#xD0B9;&#xC758; &#xD53C;&#xD574;&#xC790;&#xB294; &#xC790;&#xC8FC; &#xB450;&#xB824;&#xC6C0;, &#xC6B0;&#xC6B8;&#xC99D;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xBD84;&#xB178;&#xC758; &#xC99D;&#xC0C1; &#xB4F1;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xC2EC;&#xB9AC;&#xC801; &#xBB38;&#xC81C;&#xC758; &#xC218; &#xACBD;&#xD5D8;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC;&#xB97C; &#xB04C; &#xC694;&#xC778;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; &#xC81C;&#xD55C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC758; &#xBAA9;&#xD45C;&#xB294; &#xBA3C;&#xC800; &#xC2A4;&#xD1A0;&#xD0B9; &#xB2F9;&#xD558;&#xACE0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xC2EC;&#xB9AC;&#xC801; &#xBB38;&#xC81C;&#xC758; &#xCE21;&#xC815;&#xAC12;&#xC744; &#xAE30;&#xBC18;&#xC73C;&#xB85C; &#xD558;&#xB294; &#xC2A4;&#xD1A0;&#xD0B9; &#xD53C;&#xD574;&#xC790;&#xC758; &#xACE0;&#xC720;&#xD55C; &#xD558;&#xC704; &#xADF8;&#xB8F9;&#xC744; &#xD655;&#xC778; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD655;&#xC778; &#xD6C4; &#xB2E4;&#xC74C; &#xB2E8;&#xACC4; &#xD558;&#xC704; &#xD68C;&#xC6D0;&#xC758; &#xD655;&#xB960;&#xC5D0; &#xC778;&#xAD6C; &#xD1B5;&#xACC4; &#xBC0F; &#xC2A4;&#xD1A0;&#xD0B9; &#xAD00;&#xB828; &#xBCC0;&#xC218;&#xC758; &#xC601;&#xD5A5; &#xC870;&#xC0AC; &#xB410;&#xB2E4;. &#xACB0;&#xACFC; &#xC751;&#xB2F5;&#xC790; &#xC5EC;&#xC131; &#xD588;&#xB2E4;, &#xC2A4;&#xD1A0;&#xCEE4;&#xC640; &#xC774;&#xC804; &#xAD00;&#xACC4;&#xB97C; &#xD588;&#xB2E4;, &#xC2A4;&#xD1A0;&#xD0B9; &#xD589;&#xB3D9;&#xC758; &#xB354;&#xC6B1; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xACBD;&#xD5D8;, &#xC774;&#xD63C;/&#xBCC4;&#xAC70;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC815;&#xBD80; &#xC9C0;&#xC6D0;&#xC744; &#xBC1B;&#xB294; &#xBCF4;&#xACE0; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xACB0;&#xACFC; &#xACBD;&#xD5D8; &#xD558;&#xB294; &#xD655;&#xB960;&#xC774; &#xB192;&#xC740; &#xD2B9;&#xC9D5; &#xD558;&#xC704; &#xADF8;&#xB8F9;&#xC73C;&#xB85C; &#xBD84;&#xB958; &#xB420; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC774; &#xD588;&#xB2E4; &#xBC1D;&#xD614;&#xB2E4;.

&#xD76C;&#xC0DD;&#xC758; &#xC2A4;&#xD1A0;&#xD0B9;&#xC5D0; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xC2EC;&#xB9AC;&#xC801; &#xBC18;&#xC751;&#xC758; &#xC608;&#xCE21;&#xC790;&#xB97C; &#xC2DD;&#xBCC4;.

Las v&iacute;ctimas de acoso a menudo experimentan una serie de problemas psicol&oacute;gicos negativos incluyen cosas tales como el miedo, los s&iacute;ntomas de la depresi&oacute;n y la ira. Sin embargo, la investigaci&oacute;n sobre los factores que conducen a estos resultados es limitada. El objetivo de este estudio fue identificar subgrupos distintos de acecho v&iacute;ctimas basados en medidas de problemas psicol&oacute;gicos debidos a ser acosada. Una vez identificados, el siguiente paso era examinar la influencia de las variables demogr&aacute;ficas y relacionadas con el acoso en la probabilidad de que miembros del subgrupo. Los resultados revelaron que los encuestados que eran mujeres, ten&iacute;an una relaci&oacute;n previa con el acosador, experimentaron una mayor variedad de comportamientos de acecho, estaban divorciados/separados y denunci&oacute; haber recibido ayuda del gobierno eran m&aacute;s propensos a clasificarse en subgrupos que se caracteriza por una alta probabilidad de experimentar m&uacute;ltiples resultados negativos.

Identificar predictores de reacciones psicol&oacute;gicas negativas al acechaba de la victimizaci&oacute;n.

&#x5148;&#x524D;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x8868;&#x660E;&#x8BB8;&#x591A;&#x5F62;&#x5F0F;&#x7684;&#x5E94;&#x53D8;&#x79EF;&#x6781;&#x4E0E;&#x6709;&#x5173;&#x7684;&#x72AF;&#x7F6A;&#x3002;&#x8BC1;&#x636E;&#x8FD8;&#x8868;&#x660E;&#x5B97;&#x6559;&#x7F13;&#x51B2;&#x5E94;&#x53D8;&#x5BF9;&#x5192;&#x72AF;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#xFF0C;&#x4F46;&#x8FD9;&#x4E00;&#x95EE;&#x9898;&#x9700;&#x8981;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x4F7F;&#x7528;&#x4ECE;&#x9752;&#x5C11;&#x5E74;&#x5168;&#x56FD;&#x62BD;&#x6837;&#x8C03;&#x67E5;&#x6570;&#x636E;&#xFF0C;&#x68C0;&#x67E5;&#x5B97;&#x6559;&#x5236;&#x7EA6;&#x5E94;&#x53D8;&#x548C;&#x72AF;&#x7F6A;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x5173;&#x7CFB;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x8FD8;&#x671B;&#x7740;&#x793E;&#x4F1A;&#x652F;&#x6301;&#x3001; &#x81EA;&#x5C0A;&#x3001; &#x6291;&#x90C1;&#x60C5;&#x7EEA;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x4E2D;, &#x5EA6;&#x5F71;&#x54CD;&#x7684;&#x8FDD;&#x6CD5;&#x884C;&#x4E3A;&#x7684;&#x538B;&#x529B;&#x3002;&#x8FD9;&#x91CC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x652F;&#x6301;&#x4E00;&#x822C;&#x5E94;&#x53D8;&#x7406;&#x8BBA;&#x5728;&#x8FD9;&#x682A;&#x4EA7;&#x751F;&#x4E86;&#x76F4;&#x63A5;&#x7684;&#x79EF;&#x6781;&#x5F71;&#x54CD;&#xFF0C;&#x9752;&#x5C11;&#x5E74;&#x72AF;&#x7F6A;&#x3001; &#x5374;&#x51E0;&#x4E4E;&#x6CA1;&#x6709;&#x8BC1;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#x5173;&#x7CFB;&#x4E3B;&#x6301;&#x5B97;&#x6559;&#x6216;&#x5176;&#x4ED6;&#x8C03;&#x8282;&#x53D8;&#x91CF;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#x5BA1;&#x8BAE;&#x4E86;&#x5173;&#x4E8E;&#x8DE8;&#x6027;&#x522B;&#x7684;&#x5E94;&#x53D8;&#x8C03;&#x8282;&#x53D8;&#x91CF;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

&#x5B97;&#x6559;&#x5BF9;&#x6027;&#x751F;&#x6D3B;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x4E0E;&#x8FDD;&#x6CD5;&#x884C;&#x4E3A;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x5173;&#x7CFB;&#x5173;&#x7CFB;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;

Previous research has shown that many forms of strain are positively related to delinquency. Evidence also suggests that religiosity buffers the effects of strain on offending, but this issue requires further research. Using data from a national sample of adolescents, this study examined whether or not religiosity conditioned the relationship between strain and delinquency. This study also looked at the ability of social support, self-esteem, and depression to moderate the influence of strain on delinquent behavior. The findings here lend support to general strain theory in that strain had a direct positive effect on delinquency, yet there was little evidence that the relationship was moderated by religiosity or other conditioning variables. The roles of moderating variables on strain across genders were also considered.

The moderating effects of religiosity on the relationship between stressful life events and delinquent behavior.

Recherches ant&eacute;rieures ont montr&eacute; que de nombreuses formes de souche sont positivement associ&eacute;s &agrave; la d&eacute;linquance. Donn&eacute;es sugg&egrave;rent &eacute;galement que la religiosit&eacute; amortit les effets de la fatigue sur la d&eacute;linquance, mais cette question n&eacute;cessite des recherches plus pouss&eacute;es. &Agrave; l&#39;aide de donn&eacute;es provenant d&#39;un &eacute;chantillon national d&#39;adolescents, cette &eacute;tude examine si oui ou non la religiosit&eacute; conditionn&eacute; la relation entre la souche et la d&eacute;linquance. Cette &eacute;tude visait &eacute;galement la capacit&eacute; de soutien social, l&#39;estime de soi et d&eacute;pression &agrave; mod&eacute;rer l&#39;influence de la souche sur le comportement d&eacute;linquant. Les r&eacute;sultats ici soutiennent la th&eacute;orie g&eacute;n&eacute;rale de souche que souche avait un effet positif direct sur la d&eacute;linquance, mais il y avait peu de preuves que la relation &eacute;tait anim&eacute;e par la religiosit&eacute; ou d&#39;autres variables de la climatisation. Le r&ocirc;le des variables mod&eacute;ratrices sur souche entre sexes ont &eacute;galement &eacute;t&eacute; examin&eacute;.

Les effets mod&eacute;rateurs de la religiosit&eacute; sur la relation entre les &eacute;v&eacute;nements stressants de la vie et de comportement d&eacute;linquant.

Fr&uuml;here Untersuchungen haben gezeigt, viele Formen der Belastung positiv Delinquenz verwandt sind. Legen au&szlig;erdem nahe, dass Religiosit&auml;t die Auswirkungen der Belastung zu beleidigen puffert, aber dieses Problem weitere Untersuchungen erfordert. Mithilfe von Daten aus einer nationalen Stichprobe von Jugendlichen, untersuchte diese Studie ob Religiosit&auml;t das Verh&auml;ltnis zwischen Belastung und Delinquenz konditioniert. Diese Studie untersuchte auch die F&auml;higkeit der sozialen Unterst&uuml;tzung, Selbstwertgef&uuml;hl und Depression m&auml;&szlig;ig den Einfluss der Belastung der delinquent Verhalten. Die Ergebnisse hier verleihen unterst&uuml;tzen allgemeine Belastung Theorie in diesem Stamm einen direkten positiven Effekt auf Delinquenz hatte, noch gab es kaum Anzeichen, dass die Beziehung von Religiosit&auml;t oder anderen Variablen Klimaanlage moderiert wurde. Die Rollen der m&auml;&szlig;igenden Variablen auf Belastung &uuml;ber Geschlechter wurden ebenfalls ber&uuml;cksichtigt.

Die m&auml;&szlig;igenden Auswirkungen der Religiosit&auml;t auf die Beziehung zwischen belastenden Lebensereignisse und delinquent Verhalten.

Precedenti ricerche hanno dimostrato che molte forme di ceppo sono positivamente correlate alla delinquenza. L&#39;evidenza suggerisce anche che la religiosit&agrave; dei buffer gli effetti di deformazione su offendere, ma questo problema richiede ulteriori ricerche. Utilizzando i dati di un campione nazionale di adolescenti, questo studio ha esaminato o meno religiosit&agrave; condizionato il rapporto tra ceppo e delinquenza. Questo studio ha esaminato anche la capacit&agrave; di sostegno sociale, l&#39;autostima e depressione moderata influenza del ceppo sul comportamento delinquenziale. Le scoperte qui dare sostegno alla teoria generale del ceppo in quel ceppo ha avuto un effetto positivo diretto sulla delinquenza, ma c&#39;era poca evidenza che il rapporto &egrave; stato moderato da religiosit&agrave; o altre variabili di condizionamento. Inoltre sono stati considerati i ruoli delle variabili di moderazione sul ceppo attraverso i generi.

Gli effetti moderatrice della religiosit&agrave; sul rapporto tra eventi stressanti della vita e comportamento delinquenziale.

&#x524D;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x3001;&#x3072;&#x305A;&#x307F;&#x306E;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x5F62;&#x614B;&#x304C;&#x975E;&#x884C;&#x306B;&#x7A4D;&#x6975;&#x7684;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8A3C;&#x62E0;&#x306B;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x5B97;&#x6559;&#x3092;&#x6012;&#x3089;&#x305B;&#x308B;&#x3001;&#x3072;&#x305A;&#x307F;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x30D0;&#x30C3;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x304C;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x554F;&#x984C;&#x306F;&#x3055;&#x3089;&#x306A;&#x308B;&#x7814;&#x7A76;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x56FD;&#x7ACB;&#x9752;&#x5E74;&#x306E;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB; &#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x3001;&#x5B97;&#x6559;&#x6027;&#x3072;&#x305A;&#x307F;&#x3068;&#x975E;&#x884C;&#x3068;&#x306E;&#x95A2;&#x4FC2;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x975E;&#x884C;&#x884C;&#x52D5;&#x6B6A;&#x307F;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x7DE9;&#x548C;&#x3059;&#x308B;&#x30BD;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E3;&#x30EB; &#x30FB; &#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3001;&#x81EA;&#x5C0A;&#x5FC3;&#x3084;&#x6291;&#x3046;&#x3064;&#x306E;&#x80FD;&#x529B;&#x3092;&#x898B;&#x3066;&#x304F;&#x3060;&#x3055;&#x3044;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306A;&#x3072;&#x305A;&#x307F;&#x7406;&#x8AD6;&#x306B;&#x3072;&#x305A;&#x307F;&#x3001;&#x5EF6;&#x6EDE;&#x3001;&#x76F4;&#x63A5;&#x80AF;&#x5B9A;&#x7684;&#x306A;&#x5F71;&#x97FF;&#x304C;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x307E;&#x3060;&#x5C11;&#x3057;&#x8A3C;&#x62E0;&#x95A2;&#x4FC2;&#x5B97;&#x6559;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30A8;&#x30A2;&#x30B3;&#x30F3;&#x306E;&#x4ED6;&#x306E;&#x5909;&#x6570;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x53F8;&#x4F1A;&#x3092;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x8CB8;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3072;&#x305A;&#x307F;&#x7537;&#x5973;&#x9593;&#x3067;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x5909;&#x6570;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3082;&#x8003;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;

&#x5B97;&#x6559;&#x306E;&#x7DE9;&#x548C;&#x52B9;&#x679C;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x306E;&#x591A;&#x3044;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D5; &#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x3068;&#x975E;&#x884C;&#x884C;&#x52D5;&#x306E;&#x95A2;&#x4FC2;&#x306B;&#x95A2;&#x3059;&#x308B;&#x3002;

&#xC774;&#xC804; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xD615;&#xD0DC;&#xC758; &#xBCC0;&#xD615; &#xC5F0;&#xCCB4; &#xAE0D;&#xC815;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0AC;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC99D;&#xAC70;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; &#xAD11; &#xC801;&#xC778; &#xC2E0;&#xC559;&#xC5D0; &#xAE30;&#xBD84;&#xC744; &#xC0C1;&#xD558;&#xAC8C; &#xD558; &#xACE0;, &#xAE34;&#xC7A5;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xBC84;&#xD37C;&#xB9C1; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC;&#xC774; &#xBB38;&#xC81C;&#xB294; &#xB354; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB97C; &#xC694;&#xAD6C; &#xD55C;&#xB2E4;&#xC744; &#xC554;&#xC2DC; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; &#xAD11; &#xC801;&#xC778; &#xC2E0;&#xC559; &#xB2E8;&#xB828; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC778; &#xBC0F; &#xC5F0;&#xCCB4;&#xC758; &#xAD00;&#xACC4; &#xC5EC;&#xBD80; &#xC870;&#xC0AC; &#xCCAD;&#xC18C;&#xB144;&#xC758; &#xAD6D;&#xAC00; &#xC0D8;&#xD50C; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; &#xCCB4;&#xB0A9; &#xD589;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xAE34;&#xC7A5;&#xC758; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC911;&#xAC04;&#xC5D0; &#xC0AC;&#xD68C;&#xC801; &#xC9C0;&#xC6D0;&#xACFC; &#xC790;&#xAE30; &#xC874;&#xC911; &#xAC10;, &#xC6B0;&#xC6B8;&#xC99D;&#xC758; &#xB2A5;&#xB825;&#xC744; &#xBCF4;&#xC558;&#xB2E4;. &#xACB0;&#xACFC; &#xC5EC;&#xAE30; &#xBE4C;&#xB824; &#xC77C;&#xBC18; &#xAE34;&#xC7A5; &#xC774;&#xB860;&#xC5D0; &#xC9C0;&#xC6D0; &#xADF8; &#xAE34;&#xC7A5; &#xD588;&#xB2E4; &#xBE44;&#xD589;&#xC5D0; &#xC9C1;&#xC811; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xAE0D;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xC544;&#xC9C1; &#xC791;&#xC740; &#xC99D;&#xAC70; &#xAD00;&#xACC4;&#xB294; &#xB2E4;&#xB978; &#xC870;&#xC808; &#xBCC0;&#xC218; &#xB610;&#xB294; &#xAD11; &#xC801;&#xC778; &#xC2E0;&#xC559;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAC80;&#xD1A0; &#xB428;. &#xB0A8;&#xB140; &#xAC04;&#xC5D0; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC778;&#xC5D0; &#xC6B4;&#xC601;&#xD560; &#xBCC0;&#xC218;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560; &#xB610;&#xD55C; &#xACE0;&#xB824; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;.

&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xC0DD;&#xD65C; &#xC0AC;&#xAC74;&#xACFC; &#xCCB4;&#xB0A9; &#xD589;&#xB3D9; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xAD00;&#xACC4;&#xC5D0; &#xAD11; &#xC801;&#xC778; &#xC2E0;&#xC559;&#xC758; &#xC911;&#xC7AC; &#xD6A8;&#xACFC;.

Investigaciones anteriores han mostrado que muchas formas de tensi&oacute;n est&aacute;n positivamente relacionados con la delincuencia. Evidencia tambi&eacute;n sugiere que la religiosidad neutraliza los efectos de tensi&oacute;n en ofender, pero esta cuesti&oacute;n requiere m&aacute;s investigaci&oacute;n. Utilizando datos de una muestra nacional de adolescentes, este estudio examin&oacute; si o no la religiosidad condicionado la relaci&oacute;n entre la tensi&oacute;n y la delincuencia. Este estudio analiz&oacute; tambi&eacute;n la capacidad de moderar la influencia de tensi&oacute;n en el comportamiento delictual de apoyo social, autoestima y depresi&oacute;n. Los resultados aqu&iacute; prestan apoyo a la teor&iacute;a general de la cepa en ese esfuerzo tuvo un efecto positivo directo sobre la delincuencia, sin embargo, hubo pocas pruebas de que la relaci&oacute;n fue moderada por la religiosidad u otras variables de acondicionado. Tambi&eacute;n se consideraron los papeles de variables moderadoras en tensi&oacute;n a trav&eacute;s de g&eacute;neros.

Los efectos de moderaci&oacute;n de la religiosidad sobre la relaci&oacute;n entre los acontecimientos estresantes y comportamiento delictual.

&#x6C38;&#x6052;&#x7684;&#x901A;&#x80C0;&#x60C5;&#x51B5;&#x9884;&#x6D4B;&#x6211;&#x4EEC;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x7684;&#x5B87;&#x5B99;&#x9A7B;&#x7559;&#x7684;&#x5185;&#x5355;&#x4E2A;&#x6C14;&#x6CE1;&#x5D4C;&#x5165;&#x5728;&#x5DE8;&#x5927;&#x7684;&#x81A8;&#x80C0;&#x5B87;&#x5B99;&#x4E2D;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x76EE;&#x524D;&#x6C38;&#x6052;&#x7684;&#x901A;&#x8D27;&#x81A8;&#x80C0;&#xFF0C;&#x7B2C;&#x4E00;&#x6B21;&#x89C2;&#x6D4B;&#x7684;&#x6D4B;&#x8BD5; WMAP &#x536B;&#x661F;&#x7684;&#x5B87;&#x5B99;&#x5FAE;&#x6CE2;&#x80CC;&#x666F;&#x6570;&#x636E;&#x6267;&#x884C;&#x641C;&#x7D22;&#x4E0E;&#x5176;&#x4ED6;&#x6CE1;&#x6CAB;&#x5B87;&#x5B99;&#x78B0;&#x649E;&#x7684;&#x5B87;&#x5B99;&#x7B7E;&#x540D;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F97;&#x51FA;&#x7684;&#x7ED3;&#x8BBA; WMAP 7 &#x5E74;&#x6570;&#x636E;&#x4E0D;&#x4FDD;&#x8BC1;&#x589E;&#x52A0;&#x6C14;&#x6CE1;&#x7684;&#x78B0;&#x649E;&#x4E0E;&#x5B87;&#x5B99;&#x5E38;&#x6570;&#x7684;&#x51B7;&#x6697;&#x7269;&#x8D28;&#x6A21;&#x578B;&#x7EA6;&#x675F;&#x5E73;&#x5747;&#x53EF;&#x63A2;&#x6D4B;&#x6CE1;&#x6CAB;&#x4E0A;&#x7684;&#x78B0;&#x649E;&#x6570;&#x5B57;&#x5145;&#x5206;&#x4E0A;&#x7A7A; N [&#x250B;] _ {s} &lt; C.L.&#x666E;&#x6717;&#x514B;&#x536B;&#x661F;&#x6570;&#x636E;&#x53EF;&#x4EE5;&#x7528;&#x4E8E;&#x66F4;&#x660E;&#x786E;&#x7684; 68 %1.6 &#x6D4B;&#x8BD5;&#x6CE1;&#x78B0;&#x649E;&#x5047;&#x8BF4;&#x3002;

&#x7B2C;&#x4E00;&#x6B21;&#x89C2;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x9A8C;&#x7684;&#x6C38;&#x6052;&#x7684;&#x901A;&#x8D27;&#x81A8;&#x80C0;&#x3002;

The eternal inflation scenario predicts that our observable Universe resides inside a single bubble embedded in a vast inflating multiverse. We present the first observational tests of eternal inflation, performing a search for cosmological signatures of collisions with other bubble universes in cosmic microwave background data from the WMAP satellite. We conclude that the WMAP 7-year data do not warrant augmenting the cold dark matter model with a cosmological constant with bubble collisions, constraining the average number of detectable bubble collisions on the full sky N[over Â¯]_{s}<1.6 at 68% C.L. Data from the Planck satellite can be used to more definitively test the bubble-collision hypothesis.

First observational tests of eternal inflation.

Le sc&eacute;nario d&#39;inflation &eacute;ternelle pr&eacute;dit que notre univers observable r&eacute;side &agrave; l&#39;int&eacute;rieur une bulle unique int&eacute;gr&eacute;e dans un vaste multivers de gonflage. Nous pr&eacute;sentons les premiers tests d&#39;observation de l&#39;inflation &eacute;ternelle, en effectuant une recherche pour signatures cosmologiques des collisions avec d&#39;autres univers de bulle dans les donn&eacute;es de fond diffus cosmologique du satellite WMAP. Nous concluons que les donn&eacute;es de WMAP 7 ans ne justifient pas augmenter le mod&egrave;le de mati&egrave;re noire froide avec une constante cosmologique collisions de bulle, limitant le nombre moyen de collisions bulle d&eacute;tectable sur le plein ciel N [sur &macr;] _ {s} &lt; 1.6 &agrave; 68 % C.L. donn&eacute;es provenant du satellite Planck peut &ecirc;tre utilis&eacute; &agrave; plus d&eacute;finitivement v&eacute;rifier l&#39;hypoth&egrave;se de bulle-la collision.

Premiers tests d&#39;observation de l&#39;inflation &eacute;ternelle.

Das ewige Inflation-Szenario prognostiziert, dass unsere beobachtbaren Universums innen befindet sich eine einzelne Luftblase in einem riesigen Seitenkollision Multiverse eingebettet. Wir pr&auml;sentieren den ersten Beobachtungen Tests der ewige Inflation, Durchf&uuml;hren einer Suche f&uuml;r kosmologische Signaturen von Kollisionen mit anderen Universen Blase im kosmischen Mikrowelle Hintergrund-Daten des Satelliten WMAP. Wir schlie&szlig;en, dass die WMAP-7-Jahres-Daten nicht rechtfertigen das kalte dunkle Materie-Modell mit einer kosmologischen Konstante mit Blase Kollisionen vermehren einschr&auml;nken die durchschnittliche Anzahl der nachweisbaren Blase Kollisionen auf der vollst&auml;ndigen Himmel N [&uuml;ber &macr;] _ {s} &lt; 1.6 bei 68 % C.L. Daten aus der Planck-Satellit sich mehr endg&uuml;ltig l&auml;sst testen die Blase-Kollision-Hypothese.

Erste Beobachtungen Tests des ewige Inflation.

Lo scenario dell&#39;inflazione eterna predice che il nostro universo osservabile risiede all&#39;interno di una singola bolla incorporata in un vasto multiverso di gonfiaggio. Vi presentiamo le prime prove osservative di inflazione eterna, effettuando una ricerca per firme cosmologiche di collisioni con altri universi bolla nei dati di sfondo cosmica dal satellite WMAP. Possiamo concludere che i dati WMAP 7 anni non garantisce aumentando il modello di materia oscura fredda con una costante cosmologica con collisioni a bolla, vincolando il numero medio di collisioni bolla rilevabili sul cielo pieno N [sopra &macr;] _ {s} &lt; 1.6 al 68% C.L. dati dal satellite Planck pu&ograve; essere utilizzato per pi&ugrave; definitivamente testare l&#39;ipotesi di collisione di bolla.

Prime prove osservative di inflazione eterna.

&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x89B3;&#x6E2C;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x5B87;&#x5B99;&#x5358;&#x4E00;&#x6C17;&#x6CE1;&#x5E83;&#x5927;&#x306A;&#x81A8;&#x5F35;&#x30DE;&#x30EB;&#x30C1;&#x30D0;&#x30FC;&#x30B9;&#x3067;&#x57CB;&#x3081;&#x8FBC;&#x307E;&#x308C;&#x305F;&#x5185;&#x90E8;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x6C38;&#x9060;&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D5;&#x30EC;&#x306E;&#x30B7;&#x30CA;&#x30EA;&#x30AA;&#x3092;&#x4E88;&#x6E2C;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;WMAP &#x885B;&#x661F;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x5B87;&#x5B99;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x6CE2;&#x80CC;&#x666F;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x3092;&#x4ED6;&#x306E;&#x30D0;&#x30D6;&#x30EB; &#x30E6;&#x30CB;&#x30D0;&#x30FC;&#x30B9;&#x3068;&#x306E;&#x885D;&#x7A81;&#x306E;&#x5B87;&#x5B99;&#x8AD6;&#x7684;&#x306A;&#x7F72;&#x540D;&#x691C;&#x7D22;&#x6C38;&#x9060;&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D5;&#x30EC;&#x306E;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x89B3;&#x6E2C;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3059;&#x308B;.&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x7D50;&#x8AD6; WMAP 7 &#x5E74;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x5897;&#x5F37;&#x3001;&#x51B7;&#x305F;&#x3044;&#x6697;&#x9ED2;&#x7269;&#x8CEA;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3068;&#x5B87;&#x5B99;&#x5B9A;&#x6570;&#x306E;&#x30D0;&#x30D6;&#x30EB;&#x306E;&#x885D;&#x7A81;&#x304C;&#x4FDD;&#x8A3C;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x691C;&#x51FA;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x30D0;&#x30D6;&#x30EB;&#x885D;&#x7A81; [&#xFFE3;] &#x5B8C;&#x5168;&#x306A;&#x7A7A; N _ {s} &#x306E;&#x5E73;&#x5747;&#x306E;&#x6570;&#x3092;&#x5236;&#x9650;&#x3059;&#x308B; &lt; 1.6 &#x30D7;&#x30E9;&#x30F3;&#x30AF;&#x885B;&#x661F;&#x304B;&#x3089;&#x306E; CL &#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x4F7F;&#x7528;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x8A73;&#x7D30;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x7684;&#x306B; 68 &#xFF05; &#x3067;&#x30D0;&#x30D6;&#x30EB;&#x885D;&#x7A81;&#x4EEE;&#x8AAC;&#x3092;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x6C38;&#x9060;&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D5;&#x30EC;&#x306E;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x89B3;&#x6E2C;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3002;

&#xC601;&#xC6D0;&#xD55C; &#xC778;&#xD50C;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xC2DC;&#xB098;&#xB9AC;&#xC624; &#xAD00;&#xCC30;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC6B0;&#xC8FC;&#xC758; &#xAD11;&#xB300; &#xD55C; &#xD33D;&#xCC3D; &#xBA40;&#xD2F0;&#xC5D0; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xD558;&#xB098;&#xC758; &#xAC70;&#xD488; &#xC548;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xC804;&#xB9DD; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC120;&#xBB3C;&#xC774; &#xC601;&#xC6D0;&#xD55C; &#xC778;&#xD50C;&#xB808;&#xC774;&#xC158;&#xC758; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xAD00;&#xCE21; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; WMAP &#xC704;&#xC131;&#xC758; &#xC6B0;&#xC8FC; &#xB9C8;&#xC774;&#xD06C;&#xB85C;&#xD30C; &#xBC30;&#xACBD; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xC5D0; &#xB2E4;&#xB978; &#xAC70;&#xD488; &#xC6B0;&#xC8FC;&#xC640;&#xC758; &#xCDA9;&#xB3CC;&#xC758; &#xBA87;&#xBA87; &#xC11C;&#xBA85;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC80;&#xC0C9;&#xC744; &#xC218;&#xD589; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xACB0;&#xB860; WMAP 7 &#xB144; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xAC70;&#xD488; &#xCDA9;&#xB3CC; &#xD568;&#xAED8; &#xC6B0;&#xC8FC; &#xC0C1;&#xC218;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xCC28;&#xAC00;&#xC6B4; &#xC554;&#xD751; &#xBB3C;&#xC9C8; &#xBAA8;&#xB378; &#xBCF4;&#xAC15;&#xC744; &#xBCF4;&#xC99D; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; [0]&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC804;&#xCCB4; &#xD558;&#xB298; N _ {s}&#xC5D0; &#xCDA9;&#xB3CC; &#xAC10;&#xC9C0; &#xAC70;&#xD488;&#xC758; &#xD3C9;&#xADE0; &#xC218; &#xC81C;&#xD55C; &lt; 68% &#xB354; &#xACB0;&#xC815;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD50C;&#xB791;&#xD06C; &#xC704;&#xC131;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCE74;&#xC2A4; &#xD2F0; &#xC57C; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218;&#xC5D0;&#xC11C; 1.6 &#xAC70;&#xD488;-&#xCDA9;&#xB3CC; &#xAC00;&#xC124;&#xC744; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8;.

&#xC601;&#xC6D0;&#xD55C; &#xC778;&#xD50C;&#xB808;&#xC774;&#xC158;&#xC758; &#xCCAB; &#xAD00;&#xCE21; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

El escenario de inflaci&oacute;n eterna predice que nuestro universo observable reside dentro una sola burbuja incrustada en un vasto multiverso inflado. Presentamos las primeras pruebas observacionales de inflaci&oacute;n eterna, realizando una b&uacute;squeda para firmas cosmol&oacute;gicas de colisiones con otros universos burbuja en datos del fondo c&oacute;smico de microondas por el sat&eacute;lite WMAP. Concluimos que los datos de 7 a&ntilde;os WMAP no garantiza aumentar el modelo de materia oscura fr&iacute;a con una constante cosmol&oacute;gica con colisiones de burbuja, restringir el n&uacute;mero promedio de colisiones de burbuja perceptible en el cielo completo N [sobre &macr;] _ {s} &lt; 1.6 en 68% C.L. datos desde el sat&eacute;lite Planck puede utilizarse para m&aacute;s definitivamente probar la hip&oacute;tesis de la burbuja-colisi&oacute;n.

Primeras pruebas observacionales de inflaci&oacute;n eterna.

&#x4E8C;&#x7EF4; (2D) &#x7684;&#x7ED3;&#x6676;&#x548C;&#x7535;&#x5B50;&#x6676;&#x4F53;&#x5B66;&#x7684;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x4FE1;&#x606F;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x548C;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x5173;&#x95ED;&#x5230;&#x672C;&#x673A;&#x8102;&#x8D28;&#x53CC;&#x5C42;&#x5185;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x590D;&#x6742;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x6570;&#x91CF;&#x589E;&#x957F;&#x8FC5;&#x901F;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x63D0;&#x4F9B;&#x534F;&#x8BAE;&#x89C4;&#x5212;&#x548C;&#x6267;&#x884C; 2D &#x7ED3;&#x6676;&#x5BA1;&#x5224;&#x7684;&#x6D17;&#x6DA4;&#x5242;&#x53BB;&#x9664;&#x901A;&#x8FC7;&#x900F;&#x6790;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x78F7;&#x8102;&#x548C;&#x900F;&#x6790;&#x5B89;&#x88C5;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x7684;&#x7F16;&#x5199;&#x3002;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x56E0;&#x7D20;&#x6765;&#x8003;&#x8651;&#xFF0C;&#x5982;&#x86CB;&#x767D;&#x5236;&#x5907;&#x3001; &#x589E;&#x6EB6;&#x5242;&#x6D17;&#x6DA4;&#x5242;&#x3001; &#x8102;&#x8D28;&#x91CD;&#x7EC4;&#xFF0C;&#x548C;&#x7F13;&#x51B2;&#x533A;&#x7684;&#x6761;&#x4EF6;&#x8FDB;&#x884C;&#x8BA8;&#x8BBA;&#x3002;&#x51E0;&#x4E2A; 2D &#x7684;&#x7ED3;&#x6676;&#x6761;&#x4EF6;&#x88AB;&#x7A81;&#x51FA;&#x663E;&#x793A;&#xFF0C;&#x8868;&#x660E;&#x5F88;&#x6709;&#x5E0C;&#x671B;&#x5728;&#x5982;&#x6B64;&#x77ED;&#x7684;&#x65F6;&#x95F4;&#x5185;&#x589E;&#x957F;&#x4E8C;&#x7EF4;&#x6676;&#x4F53;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x6982;&#x8FF0;&#x4E86;&#x4F18;&#x5316;&#x987A;&#x5E8F;&#x548C;&#x5927;&#x5C0F;&#x7684;&#x4E8C;&#x7EF4;&#x6676;&#x4F53;&#x7684;&#x6761;&#x4EF6;&#x3002;

&#x901A;&#x8FC7;&#x91CD;&#x7EC4;&#x901A;&#x8FC7;&#x900F;&#x6790;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x4E8C;&#x7EF4;&#x7ED3;&#x6676;&#x3002;

Studies of membrane proteins by two-dimensional (2D) crystallization and electron crystallography have provided crucial information on the structure and function of a rapidly growing number of these intricate proteins within a close-to-native lipid bilayer. Here we provide protocols for planning and executing 2D crystallization trials by detergent removal through dialysis, including the preparation of phospholipids and the dialysis setup. General factors to be considered, such as the protein preparation, solubilizing detergent, lipid for reconstitution, and buffer conditions are discussed. Several 2D crystallization conditions are highlighted that have shown great promise to grow 2D crystals within a surprisingly short amount of time. Finally, conditions for optimizing order and size of 2D crystals are outlined.

Two-dimensional crystallization of membrane proteins by reconstitution through dialysis.

&Eacute;tudes des prot&eacute;ines membranaires par cristallographie de cristallisation et &eacute;lectrons bidimensionnel (2D) ont fourni des informations cruciales sur la structure et la fonction d&#39;un nombre rapidement croissant de ces prot&eacute;ines complexes au sein d&#39;une bicouche lipidique de la fin-&agrave;-natif. Ici, nous fournissons des protocoles pour la planification et l&#39;ex&eacute;cution des essais de cristallisation 2D par enl&egrave;vement de d&eacute;tergent par dialyse, y compris la pr&eacute;paration des phospholipides et la configuration de la dialyse. Facteurs g&eacute;n&eacute;raux &agrave; consid&eacute;rer, comme la pr&eacute;paration de la prot&eacute;ine, d&eacute;tergent solubilisant, lipides pour reconstitution des conditions de tampon et on en discute. Plusieurs conditions de cristallisation 2D sont mis en &eacute;vidence qui ont montr&eacute; de grandes promesses &agrave; produire des cristaux 2D dans un d&eacute;lai &eacute;tonnamment court. Enfin, les conditions d&#39;optimisation d&#39;ordre et la taille des cristaux 2D sont d&eacute;crites.

Deux dimensions cristallisation des prot&eacute;ines membranaires par reconstitution par dialyse.

Studien von Membranproteinen durch zweidimensionale (2D) Kristallisation und Elektron-Kristallographie haben wichtige Informationen &uuml;ber die Struktur und Funktion einer rasch wachsenden Zahl dieser komplizierten Proteine innerhalb einer Ende-zu-nativ-Lipid-Bilayer &uuml;bermittelt. Hier bieten wir Protokolle zur Planung und Durchf&uuml;hrung von 2D Kristallisation Studien durch Wasch-und Reinigungsmittel entfernen durch Dialyse, einschlie&szlig;lich der Vorbereitung der Phospholipide und der Dialyse. Allgemeine Faktoren ber&uuml;cksichtigt werden, wie die Protein-Vorbereitung, solubilizing Waschmittel, Lipid Rekonstitution und Puffer Bedingungen diskutiert werden. Mehrere 2D Kristallisation Bedingungen werden hervorgehoben, die viel versprechend zu 2D Kristalle wachsen in &uuml;berraschend kurzer Zeit gezeigt haben. Schlie&szlig;lich sind die Bedingungen f&uuml;r die Optimierung und-Gr&ouml;&szlig;e 2D Kristalle skizziert.

Zweidimensionale Kristallisation von Membranproteinen durch R&uuml;ckverd&uuml;nnung durch Dialyse.

Gli studi delle proteine di membrana da bidimensionale (2D) cristallografia di cristallizzazione ed elettrone hanno fornito informazioni cruciali sulla struttura e sulla funzione di un numero crescente di queste proteine complesse all&#39;interno di un doppio strato lipidico vicino al codice nativo. Qui forniamo protocolli per la pianificazione e l&#39;esecuzione di prove di cristallizzazione 2D da detergente rimozione tramite dialisi, compresa la preparazione di fosfolipidi e l&#39;installazione di dialisi. Generali fattori da considerare, come la preparazione di proteine, detergente solubilizzante, lipidi per la ricostituzione e condizioni di buffer sono discussi. Diverse condizioni di cristallizzazione 2D sono evidenziate che hanno mostrato grande promessa di crescere 2D cristalli entro un lasso di tempo sorprendentemente breve. Infine, sono descritte le condizioni per l&#39;ottimizzazione di ordine e le dimensioni dei cristalli 2D.

Cristallizzazione bidimensionale delle proteine di membrana mediante ricostituzione tramite dialisi.

&#x7814;&#x7A76; 2&#x6B21;&#x5143; (2 D) &#x306E;&#x7D50;&#x6676;&#x5316;&#x3068;&#x96FB;&#x5B50;&#x7DDA;&#x7D50;&#x6676;&#x5B66;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x819C;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x3068;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306B;&#x95A2;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x9589;&#x3058;&#x308B;-&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x8102;&#x8CEA;&#x4E8C;&#x5206;&#x5B50;&#x819C;&#x5185;&#x306E;&#x6025;&#x901F;&#x306B;&#x6210;&#x9577;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x6570;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x60C5;&#x5831;&#x304C;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x8A08;&#x753B;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6D17;&#x5264;&#x306E;&#x9664;&#x53BB;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x30EA;&#x30F3;&#x8102;&#x8CEA;&#x3068;&#x900F;&#x6790;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x30A2;&#x30C3;&#x30D7;&#x306E;&#x6E96;&#x5099;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x900F;&#x6790;&#x306B;&#x3088;&#x308B; 2&#x6B21;&#x5143;&#x7D50;&#x6676;&#x5316;&#x8A66;&#x9A13;&#x3092;&#x5B9F;&#x884C;&#x3059;&#x308B;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30B3;&#x30EB;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x6E96;&#x5099;&#x3001;&#x6EB6;&#x89E3;&#x6D17;&#x5264;&#x3001;&#x8102;&#x8CEA;&#x518D;&#x69CB;&#x6210;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30D0;&#x30C3;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x6761;&#x4EF6;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x8003;&#x616E;&#x3059;&#x308B;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306A;&#x8981;&#x56E0;&#x3002;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E; 2&#x6B21;&#x5143;&#x7D50;&#x6676;&#x5316;&#x6761;&#x4EF6;&#x306F;&#x3001;&#x9A5A;&#x304F;&#x307B;&#x3069;&#x77ED;&#x6642;&#x9593;&#x5185;&#x3067;&#x306E; 2&#x6B21;&#x5143;&#x7D50;&#x6676;&#x3092;&#x6210;&#x9577;&#x3059;&#x308B;&#x5049;&#x5927;&#x306A;&#x7D04;&#x675F;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x5F37;&#x8ABF;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;&#x3001;2&#x6B21;&#x5143;&#x7D50;&#x6676;&#x306E;&#x9806;&#x5E8F;&#x3068;&#x30B5;&#x30A4;&#x30BA;&#x3092;&#x6700;&#x9069;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6761;&#x4EF6;&#x306E;&#x3068;&#x304A;&#x308A;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#x900F;&#x6790;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x518D;&#x69CB;&#x6210;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x819C;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x4E8C;&#x6B21;&#x5143;&#x7D50;&#x6676;&#x5316;&#x3002;

&#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; 2 &#xCC28;&#xC6D0; (2D) &#xACB0;&#xC815; &#xD654; &#xBC0F; &#xC804;&#xC790; &#xACB0;&#xC815;&#xD559;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xAD6C;&#xC870;&#xC640; &#xAC00;&#xAE4C;&#xC774; &#xB124;&#xC774;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xC9C0;&#xC9C8; bilayer &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xAE09;&#xC18D; &#xD558; &#xAC8C; &#xC99D;&#xAC00;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC815;&#xBCF4;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xACC4;&#xD68D; &#xBC0F; &#xD22C; &#xC11D;, &#xC778;&#xC9C0;&#xC9C8; &#xBC0F; &#xD22C; &#xC11D; &#xC124;&#xCE58; &#xC900;&#xBE44; &#xB4F1;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC138;&#xC81C; &#xC81C;&#xAC70; &#xD558; &#xC5EC; 2 &#xCC28;&#xC6D0; &#xACB0;&#xC815; &#xD654; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xC2E4;&#xD589;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAC19;&#xC740; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC900;&#xBE44;, solubilizing &#xC138;&#xC81C;, &#xC7AC;&#xAD6C;&#xC131;, &#xBC84;&#xD37C; &#xC870;&#xAC74;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC9C0;&#xC9C8;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD558;&#xB294; &#xACE0;&#xB824;&#xD574; &#xC57C; &#xD560; &#xC694;&#xC18C;&#xB97C; &#xC77C;&#xBC18;. &#xC5EC;&#xB7EC; 2D &#xACB0;&#xC815; &#xD654; &#xC870;&#xAC74;&#xC5D0; &#xB180;&#xB77C;&#xC6B8; &#xC815;&#xB3C4;&#xB85C; &#xC9E7;&#xC740; &#xC2DC;&#xAC04; &#xB0B4; 2 &#xCC28;&#xC6D0; &#xACB0;&#xC815; &#xC131;&#xC7A5; &#xC704;&#xB300;&#xD55C; &#xC57D;&#xC18D;&#xC744; &#xAC15;&#xC870; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C;, 2 &#xCC28;&#xC6D0; &#xACB0;&#xC815;&#xC758; &#xD06C;&#xAE30;&#xC640; &#xC21C;&#xC11C;&#xB97C; &#xCD5C;&#xC801;&#xD654; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD55C; &#xC870;&#xAC74;&#xC740; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xD22C; &#xC11D;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC7AC;&#xAD6C;&#xC131; &#xD558; &#xC5EC; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; 2 &#xCC28;&#xC6D0; &#xACB0;&#xC815; &#xD654;.

Estudios de prote&iacute;nas de membrana de dos dimensiones (2D) Cristalograf&iacute;a de cristalizaci&oacute;n y electr&oacute;nica han proporcionado informaci&oacute;n crucial sobre la estructura y funci&oacute;n de un n&uacute;mero creciente de estas prote&iacute;nas complejas en una bicapa lip&iacute;dica cerrar-a-nativo. Aqu&iacute; le ofrecemos protocolos para la planificaci&oacute;n y ejecuci&oacute;n de ensayos de cristalizaci&oacute;n 2D por extracci&oacute;n del detergente a trav&eacute;s de la di&aacute;lisis, incluida la preparaci&oacute;n de los fosfol&iacute;pidos y la configuraci&oacute;n de la di&aacute;lisis. Factores generales a considerar, tales como la preparaci&oacute;n de la prote&iacute;na, detergente solubilizaci&oacute;n, l&iacute;pidos para la reconstituci&oacute;n y condiciones de b&uacute;fer se discuten. Varias condiciones de cristalizaci&oacute;n 2D destacan que han demostrado gran promesa para crecer cristales 2D en un sorprendentemente corto periodo de tiempo. Finalmente, se detallan las condiciones para optimizar el orden y el tama&ntilde;o de los cristales 2D.

Dos dimensiones cristalizaci&oacute;n de prote&iacute;nas de la membrana por reconstituci&oacute;n a trav&eacute;s de la di&aacute;lisis.

&#x7ED3;&#x6784;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027;&#x548C;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x7535;&#x5B50;&#x6676;&#x4F53;&#x5B66;&#x5305;&#x62EC;&#x51E0;&#x4E2A;&#x5173;&#x952E;&#x6B65;&#x9AA4;&#x3002;&#x4E8C;&#x7EF4; (2D) &#x7ED3;&#x6676;&#x53EF;&#x4EE5;&#x8BF4;&#x662F;&#x53EF;&#x79F0;&#x4E3A;&#x7535;&#x5B50;&#x6676;&#x4F53;&#x5B66;&#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x74F6;&#x9888;&#xFF0C;&#x867D;&#x7136;&#x7528;&#x900F;&#x5C04;&#x7535;&#x5B50;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C; (EM) &#x6765;&#x6807;&#x8BC6;&#x4E8C;&#x7EF4;&#x6676;&#x4F53;&#x7B5B;&#x9009;&#x9700;&#x8981;&#x975E;&#x5E38;&#x8C28;&#x614E;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x5B9E;&#x8DF5;&#x3002;&#x6837;&#x54C1;&#x5236;&#x5907;&#x548C; EM &#x662F;&#x6BD4;&#x8F83;&#x5BB9;&#x6613;&#x83B7;&#x5F97;&#xFF0C;&#x76F8;&#x6BD4;&#x7B2C;&#x4E00;&#x6B21;&#x6709;&#x5E8F;&#x9635;&#x5217;&#x7684;&#x9274;&#x5B9A;&#x7684;&#x6280;&#x80FD;&#x3002;&#x6DFB;&#x52A0;&#x5230;&#x6B64;&#xFF0C;&#x819C;&#x53EF;&#x80FD;&#x6709;&#x5404;&#x79CD;&#x5404;&#x6837;&#x7684;&#x5F62;&#x6001;&#x548C;&#x5927;&#x5C0F;&#x3002;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x4E8C;&#x7EF4;&#x6676;&#x4F53;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x8BC4;&#x4EF7;&#x6837;&#x672C;&#x7684;&#x7B5B;&#x67E5;&#x4E2D;&#x6240;&#x6D89;&#x53CA;&#x7684;&#x6240;&#x6709;&#x6B65;&#x9AA4;&#x3002;

&#x8D1F;&#x67D3;&#x8272;&#x6837;&#x54C1;&#x7684;&#x900F;&#x5C04;&#x7535;&#x955C;&#x7B5B;&#x67E5;&#x4E8C;&#x7EF4;&#x6676;&#x4F53;&#x3002;

Structural studies of soluble and membrane proteins by electron crystallography include several critical steps. While the two-dimensional (2D) crystallization arguably may be described as the major bottleneck of electron crystallography, the screening by transmission electron microscopy (EM) to identify 2D crystals requires great care as well as practice. Both sample preparation and EM are skills that are relatively easily acquired, compared to the identification of the first ordered arrays. Added to this, membranes may have a variety of morphologies and sizes. Here we describe all steps involved in the screening for 2D crystals as well as the evaluation of samples.

Screening for two-dimensional crystals by transmission electron microscopy of negatively stained samples.

&Eacute;tudes structurales des solubles et les prot&eacute;ines membranaires par cristallographie &eacute;lectronique comprennent plusieurs &eacute;tapes cruciales. Tandis que la cristallisation de la bidimensionnelle (2D) sans doute peut qualifier le goulot d&#39;&eacute;tranglement majeur de cristallographie &eacute;lectronique, l&#39;examen par microscopie &eacute;lectronique &agrave; transmission (EM) pour identifier les cristaux 2D n&eacute;cessite grand soin ainsi que pratique. Pr&eacute;paration des &eacute;chantillons et EM sont tous deux comp&eacute;tences acquises relativement facilement, par rapport &agrave; l&#39;identification des premiers tableaux command&eacute;s. Ajout&eacute; &agrave; cela, les membranes peuvent avoir une vari&eacute;t&eacute; de tailles et morphologies. Nous d&eacute;crivons ici toutes les &eacute;tapes &agrave; suivre pour le d&eacute;pistage des cristaux 2D ainsi que l&#39;&eacute;valuation des &eacute;chantillons.

D&eacute;pistage de cristaux bidimensionnels par microscopie &eacute;lectronique &agrave; transmission d&#39;&eacute;chantillons color&eacute;es n&eacute;gativement.

Strukturelle Studien von l&ouml;slichen und Membranproteine durch Elektronen Kristallographie umfassen mehrere wichtige Schritte. W&auml;hrend die zweidimensionale (2D)-Kristallisation wohl als Engpass der Elektron-Kristallographie bezeichnet werden kann, erfordert das Screening von Transmissionselektronenmikroskopie (EM) zur Identifizierung von 2D Kristalle gro&szlig;er Sorgfalt als auch Praxis. Probenvorbereitung und EM sind F&auml;higkeiten, die relativ leicht erworben werden, im Vergleich zur Identifizierung der ersten bestellten Arrays. Dazu m&uuml;ssen die Membranen verschiedener Gr&ouml;&szlig;en und Morphologien. Hier beschreiben wir alle Schritte, die beim Screening f&uuml;r 2D Kristalle sowie die Auswertung der Proben.

Screening f&uuml;r zweidimensionale Kristalle von Transmissionselektronenmikroskopie negativ gef&auml;rbten Proben.

Studi strutturali di solubili e proteine di membrana di cristallografia elettrone includono diversi passaggi critici. Mentre la cristallizzazione bidimensionale (2D) probabilmente pu&ograve; essere descritto come il collo di bottiglia principale di cristallografia di elettrone, lo screening di microscopia elettronica della trasmissione (EM) per identificare i 2D cristalli richiede grande cura, come pure la pratica. Sia la preparazione del campione ed EM sono abilit&agrave; che sono relativamente facilmente acquisita, rispetto all&#39;identificazione delle matrici ordinate prime. Aggiunto a questo, le membrane possono avere una variet&agrave; di morfologie e dimensioni. Qui descriviamo tutti i passaggi coinvolti nello screening per 2D cristalli, nonch&eacute; la valutazione dei campioni.

Lo screening per cristalli bi-dimensionali di microscopia elettronica della trasmissione dei campioni colorati negativamente.

&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x7814;&#x7A76;&#x3068;&#x96FB;&#x5B50;&#x7DDA;&#x7D50;&#x6676;&#x5B66;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x819C;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x624B;&#x9806;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;2 &#x6B21;&#x5143; (2 D) &#x306E;&#x7D50;&#x6676;&#x5316;&#x306F;&#x9593;&#x9055;&#x3044;&#x306A;&#x304F;&#x96FB;&#x5B50;&#x7DDA;&#x7D50;&#x6676;&#x5B66;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x30DC;&#x30C8;&#x30EB;&#x30CD;&#x30C3;&#x30AF;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x900F;&#x904E;&#x96FB;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1; (2&#x6B21;&#x5143;&#x7D50;&#x6676;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B; EM) &#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x7DF4;&#x7FD2;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x7D30;&#x5FC3;&#x306E;&#x6CE8;&#x610F;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x8A66;&#x6599;&#x8ABF;&#x88FD;&#x3068; EM &#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306F;&#x3001;&#x6BD4;&#x8F03;&#x7684;&#x7C21;&#x5358;&#x306B;&#x53D6;&#x5F97;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x9806;&#x5E8F;&#x4ED8;&#x304D;&#x914D;&#x5217;&#x306E;&#x8B58;&#x5225;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x30B9;&#x30AD;&#x30EB;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306B;&#x52A0;&#x3048;&#x3001;&#x819C;&#x306E;&#x5F62;&#x614B;&#x3084;&#x5927;&#x304D;&#x3055;&#x306E;&#x69D8;&#x3005; &#x306A;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306E;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x306E;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306B; 2&#x6B21;&#x5143;&#x7D50;&#x6676;&#x306E;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x3067;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x624B;&#x9806;&#x3092;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

2&#x6B21;&#x5143;&#x7D50;&#x6676;&#x306E;&#x900F;&#x904E;&#x578B;&#x96FB;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5426;&#x5B9A;&#x7684;&#x306B;&#x67D3;&#x8272;&#x8A66;&#x6599;&#x306E;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x3002;

&#xC6A9; &#xD574;&#xC758; &#xAD6C;&#xC870; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xBC0F; &#xC804;&#xC790; &#xACB0;&#xC815;&#xD559;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB9C9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBA87; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xB2E8;&#xACC4;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. 2 &#xCC28;&#xC6D0; (2D) &#xACB0;&#xC815; &#xD654; &#xD2C0;&#xB9BC; &#xC5C6;&#xC774; &#xC804;&#xC790; &#xACB0;&#xC815;&#xD559;&#xC758; &#xC8FC;&#xC694; &#xBCD1;&#xBAA9; &#xD604;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xC124;&#xBA85; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;, &#xC804;&#xC1A1; &#xC804;&#xC790; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; (EM) 2D &#xD06C;&#xB9AC;&#xC2A4;&#xD0C8;&#xC744; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558; &#xC5EC; &#xC2EC;&#xC0AC; &#xC5F0;&#xC2B5;&#xC73C;&#xB85C; &#xD070; &#xAD00;&#xC2EC;&#xACFC; &#xD544;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC0D8;&#xD50C; &#xC900;&#xBE44; &#xBC0F; EM&#xC740; &#xC0C1;&#xB300;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC27D;&#xAC8C; &#xC778;&#xC218;&#xB294; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xC815;&#xB82C; &#xB41C; &#xBC30;&#xC5F4; &#xC2DD;&#xBCC4;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xAE30;&#xC220;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xAC83;&#xC5D0; &#xCD94;&#xAC00;, &#xB9C9; &#xBB38;&#xBC95;&#xACFC; &#xD06C;&#xAE30;&#xC758; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C;&#xC774; &#xC788;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC0D8;&#xD50C; &#xD3C9;&#xAC00; &#xBC0F; 2D &#xD06C;&#xB9AC;&#xC2A4;&#xD0C8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC2EC;&#xC0AC;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xB2E8;&#xACC4;&#xB97C; &#xC124;&#xBA85;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

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Estudios estructurales de solubles y prote&iacute;nas de la membrana por Cristalograf&iacute;a de electr&oacute;n incluyen varios pasos cr&iacute;ticos. Mientras que la cristalizaci&oacute;n (2D) bidimensional podr&iacute;a decirse que puede describirse como el principal cuello de botella de Cristalograf&iacute;a de la electr&oacute;nica, la proyecci&oacute;n por microscop&iacute;a electr&oacute;nica de transmisi&oacute;n (EM) para identificar cristales 2D requiere mucho cuidado, as&iacute; como la pr&aacute;ctica. Preparaci&oacute;n de muestras tanto EM son habilidades que se adquieren relativamente f&aacute;cil, comparado con la identificaci&oacute;n de los primeros arreglos ordenados. Sumado a esto, las membranas pueden tener una variedad de tama&ntilde;os y morfolog&iacute;as. Aqu&iacute; se describen todos los pasos involucrados en la investigaci&oacute;n para cristales 2D, as&iacute; como la evaluaci&oacute;n de las muestras.

Detecci&oacute;n de cristales bidimensionales por microscop&iacute;a electr&oacute;nica de transmisi&oacute;n de muestras negativamente manchadas.

Two-dimensional (2D) crystals of integral membrane proteins, comprising ordered protein reconstituted into a synthetic lipid bilayer, can be induced to form from detergent solubilized and purified membrane protein sources via the addition of exogenous lipid and the subsequent removal of the solubilizing detergent. This is most commonly accomplished by dialysis of a small volume of ternary protein-detergent-lipid mixture against a large volume of buffer, and can be carried out using common, easily available materials. Following successful crystallization, electron crystallographic data obtained by electron cryo-microscopy (cryo-EM) of vitrified 2D crystals can be used to determine the structure of the lipid bilayer-embedded integral membrane protein.

Two-dimensional crystallization by dialysis for structural studies of membrane proteins by the cryo-EM method electron crystallography.

Electron cryomicroscopy (cryo-EM) has evolved as a widely used approach to understand a range of structure-function questions, particularly of membrane proteins. Studies by both electron crystallography and single particle analysis have provided a wealth of information on membrane transport proteins. Cryo-EM methods with an emphasis on electron crystallography, which has yielded the most membrane transport protein structural information of any of the cryo-EM techniques, are described here. Two-dimensional crystallization approaches are outlined, as well as advances in cryo-EM specimen preparation, data collection, and image processing. Examples of membrane transport protein structure described serve to illustrate some of the advances in both structural understanding and methods. Further examples outline impressive results that were obtained by a combination of electron crystallography and X-ray crystallography as well as additional complementary methods.

Cryo-EM in the study of membrane transport proteins.

The electron cryo-microscopy (cryo-EM) approach of 2D electron crystallography allows for structure determination of two-dimensional (2D) crystals of soluble and membrane proteins, employing identical principles and methods once 2D crystals are obtained. Two-dimensional crystallization trials of membrane proteins can result in multiple outcomes of ordered arrays, which may be suited for either 2D electron crystallography, helical analysis, or MicroED.The membrane protein 2D crystals used for 2D electron crystallography are either single- or double-layered ordered proteoliposome vesicles or sheet-like membranes. We have developed a cryo-EM grid preparation approach, which allows for the analysis of stacked 2D crystals that are neither suitable for MicroED nor for directly applying 2D electron crystallography. This new grid preparation approach, the peel-blot, uses the capillary force generated by submicron filter paper and mechanical means for the separation of stacked 2D crystals into single-layered 2D crystals, for which standard 2D electron crystallography can then be employed. The preparation of 2D crystals, the peel-blot grid preparation, and the structure determination by 2D electron crystallography are described here.

Matthew C. Johnson

School of Biology,
School of Biological Sciences

Georgia Institute of Technology

Assessing Two-dimensional Crystallization Trials of Small Membrane Proteins for Structural Biology Studies by Electron Crystallography

The Peel-Blot Technique: A Cryo-EM Sample Preparation Method to Separate Single Layers From Multi-Layered or Concentrated Biological Samples

Matthew C. Johnson

.css-o250i3{font-size:18px;font-family:Open Sans,sans-serif;line-height:21.6px;}School of Biology,School of Biological Sciences

Georgia Institute of Technology

Assessing Two-dimensional Crystallization Trials of Small Membrane Proteins for Structural Biology Studies by Electron Crystallography

The Peel-Blot Technique: A Cryo-EM Sample Preparation Method to Separate Single Layers From Multi-Layered or Concentrated Biological Samples

School of Biology,
School of Biological Sciences