Hétérotopique et orthotopique transplantation trachéale chez des souris utilisées comme modèles pour étudier le développement de maladies des voies respiratoires oblitérante

Résumé

Cette vidéo montre et compare deux modèles expérimentaux pour étudier le développement de maladies des voies respiratoires oblitérante (OAD) chez la souris, le modèle orthotopique transplantation hétérotopique et la trachée.

Résumé

Oblitérante des voies respiratoires maladie (OAD) est la complication majeure après transplantation pulmonaire qui limite la survie à long terme (1-7).

Pour étudier la physiopathologie, le traitement et la prévention des OAD, différents modèles animaux de la transplantation de la trachée chez les rongeurs ont été développés (1-7). Ici, nous utilisons deux modèles établis de la trachée de transplantation, le modèle orthotopique et hétérotopique et démontrer leurs avantages et leurs limites.

Pour le modèle hétérotopique, la trachée donneur est enveloppé dans le grand épiploon du destinataire, alors que la trachée donateurs est anastomosée à la fin-en-bout anastomose dans le modèle orthotopique.

Dans les deux modèles, le développement des lésions histologiques oblitérante similaires à ADO clinique a été démontrée (1-7).

Cette vidéo montre comment effectuer les deux, le hétérotopique ainsi que la technique de transplantation orthotopique de la trachée chez des souris, et compare le cours du temps de développement ADO dans les deux modèles en utilisant l'histologie.

Protocole

1. Homme souris Balb / C (8-12 semaines) sont achetés auprès de Charles River Laboratories (Sulzfeld, Allemagne). Les souris sont logées dans des conditions classiques, nourri des souris standard de la nourriture et eau ad libitum.
2. Isofluran 2% est utilisée pour l'anesthésie.

PRÉPARATION DES DONATEURS

1. Raser les poils abdominaux et désinfecter la zone en utilisant betaisodona.
2. Sous vue microscopique, effectuer une incision médiane cervicale au niveau du larynx au sternum.
3. Retirez la graisse sous-cutanée et les muscles sangle pour obtenir une vue claire de la trachée.
4. Disséquer la trachée de tout les tissus environnants, comme l'œsophage, les nerfs, les artères et les tissus conjonctifs.
5. Retirez l'ensemble trachée (à partir du larynx à la bifurcation).
6. Rincer la greffe avec une solution saline froide et conserver la greffe à 4 ° C.
7. Le donneur est euthanasié par dislocation cervicale après la récolte de la trachée.

DESTINATAIRE: transplantation hétérotopique

1. Raser les poils abdominaux dans une large marge autour du site d'incision et de désinfecter la zone à trois reprises en utilisant betaisodona (bétadine), suivi par l'alcool. Les yeux doivent être lubrifiés avec un produit pommade ophtalmique pour éviter les cornées de s'assécher.
2. Effectuer une laparotomie médiane et le lieu de l'intestin dans un stérile, gants moistured.
3. Passez le grand omentum attentivement. Placez le greffon dans le centre et fixer avec une suture simple en utilisant 8-0 (Prolène, Ethicon, Allemagne).
4. Couvrir entièrement la greffe avec le grand omentum et fixer la greffe avec une suture simple 8-0 (Prolène, Ethicon, Allemagne).
5. Relocaliser les intestins dans l'abdomen et rincer à chaud, une solution saline stérile avant la fermeture.
6. Près de 2 couches - paroi abdominale et la couche de la peau avec un motif en continu en utilisant 7-0 Prolène pour le muscle et 7-0 Vicryl pour la peau.

DESTINATAIRE: LA TRANSPLANTATION orthotopique

1. Raser les poils abdominaux dans une large marge autour du site d'incision et de désinfecter la zone à trois reprises en utilisant betaisodona (bétadine), suivi par l'alcool. Les yeux doivent être lubrifiés avec un produit pommade ophtalmique pour éviter les cornées de s'assécher.
2. Diviser les muscles dragonne pour visualiser l'ensemble du complexe laryngo-trachéale.
3. Soigneusement disséquer la trachée des tissus environnants, prendre soin de préserver les nerfs laryngé récurrent.
4. Diviser les trois anneaux trachée caudale du cricoïde. L'animal maintient la respiration physiologique via la trachéotomie.
5. S'assurer que le nettoyage des bords de la trachée chez le destinataire, ainsi que dans le greffon.
6. Le greffon est interposé entre les défauts bénéficiaires de la trachée et orienté à maintenir la polarité anatomique.
7. En utilisant 8-0 (Prolène, Ethicon, Allemagne) s'anastomosent greffon du donneur avec le distal (médiastin) trachée. La face postérieure de l'anastomose est réalisée à la mode fonctionnement continu. La face antérieure est ensuite complétée en utilisant points séparés.
8. Retirez toutes les sécrétions des voies aériennes.
9. L'anastomose proximale est ensuite complétée de la même manière que celui distale.
10. Assurer l'intégrité des voies aériennes et adéquate, la respiration spontanée.
11. Relocaliser les muscles et fermer la sangle de tissu sous-cutané et la couche de peau en utilisant des sutures 6-0 (Vicryl, Ethicon, Allemagne) avec le modèle continu.
12. Utilisez une anesthésie par injection pour le destinataire, donc l'animal conserve respiration physiologique à travers la trachée. Une combinaison de 75/1/0.2 mg / kg de propofol, du fentanyl et de la médétomidine, respectivement, est utilisée pour l'anesthésie ip chez la souris.

Figure 1: Donateur trachée.
1A: Donateur trachée in situ après la préparation.
1B: la trachée donateurs excisées.
1C: Donateur trachée après l'explantation.

Figure 2: Modèle hétérotopique.
2A: Le greffon est positionné au centre du grand épiploon.
2B: La greffe est fixée aux deux extrémités par une suture simple.
2C: Le greffon est enveloppé dans le grand épiploon et fixé avec une suture simple.

Figure 3: modèle orthotopique.
3A: Le greffon est interposé entre les bénéficiaires de la trachée et les défauts de la paroi postérieure est anastomosée à la mode fonctionnement continu.
3B: La paroi antérieure est terminée à l'aide d'une suture simple.

Figure 4: Histologie.
4A: Réformé trachée hétérotopique transplanté après 28 jours dans la sta H + EMINIER (15x). Notez l'effacement de 100% luminal.
4B: Réformé orthotopique trachée transplantée après 60 jours dans la coloration H + E (15x). Maximal anéantissement atteint luminale est d'environ 45%.

	Hétérotopique modèle de transplantation trachéale	Orthotopique modèle de transplantation trachéale
Avantages	+ Facile à exécuter + Effacement Luminal avec une occlusion complète des voies aériennes après 28 jours + Pas d'affection physique des animaux par ADO	Ventilation + physique de la greffe + Administration des médicaments inhalés possibles + Forte réactions immunologiques telles que la production d'anticorps IgM alloréactives + Milieu physiologique thoraciques + Trachéale-trachéale anastomose imite le contexte clinique
Inconvénients	- Pas de ventilation de la trachée transplantée - Aucune évaluation des agents pathogènes inhalés possibles - Inhibition de la clairance mucociliaire et les sécrétions retenues - Microenvironnement péritonéal, au lieu du milieu thoraciques	- La formation chirurgicale nécessaire - L'effacement Luminal avec l'occlusion luminale app. 45% après 60 jours - Les animaux peuvent développer des symptômes de ADO

Tableau 1: Avantages et inconvénients de la transplantation orthotopique et hétérotopique trachéales.

Discussion

Les souris sont disponibles en différentes transgeneic et le modèle KO, et convient donc d'étudier des questions liées aux mécanistes ADO (4).
Les deux modèles de la transplantation trachéale montré dans cette vidéo peut être utilisé comme modèles fiables pour étudier le développement ADO.
Cependant, chaque modèle démontre les avantages et les limites.

La transplantation hétérotopique trachéale est facile à réaliser et ne nécessite pas...