TEP et IRM guidé l’Irradiation d’un modèle de Rat de glioblastome en utilisant un Micro-irradiateur

Résumé

Petite animale irradiation a été habituellement faite dans le passé, sans la possibilité de cibler un volume des tumeurs bien délimitées. Le but était d’imiter le traitement du glioblastome humain chez les rats. En utilisant une plate-forme petit animal de l’irradiation, nous avons effectué irradiation conformationnelle 3D guidée par MRI avec base de PET sous volume stimuler dans un cadre préclinique.

Résumé

Pendant des décennies, recherche de petits animaux rayonnement principalement s’est déroulée à l’aide de configurations expérimentales assez brutes, appliquant des techniques simples de faisceau unique sans la capacité de cibler un volume tumoral spécifique ou bien défini. La livraison de rayonnement a été réalisée à l’aide de sources de rayonnement fixe ou accélérateurs linéaires produisant des rayons x megavoltage (MV). Ces dispositifs sont incapables d’atteindre submillimétrique précision requise pour petits animaux. En outre, les fortes doses livré à saine évaluation environnante de la réaction du panier de tissu. Pour augmenter la traduction entre petites études sur les animaux et les humains, notre but était d’imiter le traitement du glioblastome humain dans un modèle de rat. Pour activer une irradiation plus précise dans un cadre préclinique, récemment, des plates-formes de recherche guidée par l’image de rayonnement animaux petite précision ont été développés. Similaire aux systèmes humains de planification, planification sur ces micro-irradiateurs le traitement repose sur la tomodensitométrie (TDM). Cependant, faible contraste des tissus mous sur CT le rend très difficile de localiser les cibles dans certains tissus, comme le cerveau. Par conséquent, incorporant l’imagerie par résonance magnétique (IRM), qui a un excellent contraste des tissus mous par rapport aux CT, permettrait une délimitation plus précise de la cible pour l’irradiation. Dans les dernières techniques d’imagerie biologique aussi dix ans, comme la tomographie par émission de positrons (PET) acquise intérêt pour l’orientation de rayonnement thérapie traitement. PET permet de visualiser par exemple, la consommation de glucose, acides aminés transport ou hypoxie, présent dans la tumeur. Ciblant les parties très prolifératives ou résistant à la radio de la tumeur avec une dose plus élevée pourrait donner un avantage de survie. Cette hypothèse conduit à l’introduction du volume des tumeurs biologique (BTV), outre le volume cible brut conventionnel (GTV), volume cible clinique (CTV) et volume (PTV) de la cible prévue.

Le laboratoire d’imagerie préclinique de l’Université de Gand, un micro-irradiateur, un petit animal animal de compagnie et un petit animal de 7 T MRI sont disponibles. L’objectif était d’incorporer l’irradiation guidée par MRI et PET-guidé sous volume augmentant dans un modèle de rat de glioblastome.

Introduction

Gliome est la plus courante et la plus agressive des tumeurs malignes du cerveau chez l’adulte avec une survie médiane de 1 an malgré les modalités actuelles de traitement. La norme de diligence comprend maximale résection chirurgicale suivie de combiné radiothérapie externe (RT) et témozolomide (TMZ), suivie d’entretien TMZ^1,2,3. Depuis l’introduction du TMZ maintenant plus de 15 ans, aucune améliorations significatives n’ont été apportées dans le traitement de ces tumeurs. Par conséquent, la mise en œuvre de nouvelles stratégies thérapeutiques est urgent mais doit être tout d’abord étudié dans des modèles de thérapie de cancer animal petit (pour la plupart des souris et des rats). Modèles de rongeurs porteurs de tumeur permet d’étudier l’efficacité des protocoles de radiations nouvelles et complexes, éventuellement combiné avec d’autres agents de traitement (nouveau), pour évaluer la réaction de rayonnement ou d’enquêter sur les agents de radio-protection. Un avantage majeur de recherche préclinique de rayonnement est la capacité de travailler dans des conditions expérimentales contrôlées à l’aide de grandes cohortes résultant avec un rendement de données accéléré en raison de l’espérance de vie plus courte des rongeurs. Les résultats précliniques doivent ensuite être traduites en un essai clinique d’une manière beaucoup plus rapide et plus efficace que l’actuelle pratique⁴.

Expériences de petits animaux rayonnement dans les dernières décennies généralement réalisées à l’aide de sources de rayonnement fixe^5,6,7, p. ex., ¹³⁷Cs et ⁶⁰Co, isotopes, ou linéaires accélérateurs à usage clinique humaine, appliquant un champ de rayonnement unique avec MV rayons x^6,8,9,10,11. Toutefois, ces appareils ne parviennent pas à précision submillimétrique, ce qui est nécessaire pour les petits animaux¹². En outre, MV radiographies ont caractéristiques inadaptées pour irradier les petites cibles, comme une accumulation de dose à l’interface air-tissu dans la région de l’entrée de la poutre avec une certaine mesure l’ordre de l’animal lui-même taille^{4,6 ,8,9,10,11}. Ce dernier rend assez difficile à administrer une dose uniforme à une tumeur tout en épargnant qui entoure le cerveau normal tissus^4,8,9,10,11. Par conséquent, on ignore à quelles études animales actuel de mesure sont encore pertinentes pour moderne RT pratique¹². À cet égard, récemment mis au point en trois dimensions (3D) conforme petits animaux micro-irradiateurs sont prometteuses pour combler le fossé technologique entre 3D guidée par l’image RT techniques avancées, telles que la radiothérapie intensité modulée (IMRT) ou des arcs utilisés chez les humains et les actuels petits animaux irradiation^4,13. Ces plates-formes font usage d’une source de rayons x kilovoltage (kV) pour obtenir penumbras forte et pour éviter l’accumulation de dose. Ces plateformes incluent un stade commandé par ordinateur pour l’animal, positionnement, un kV source de rayons x pour l’imagerie et de radiothérapie, d’une Assemblée de rotation portique pour permettre la livraison de rayonnement de différents angles et un système de collimation de façonner le faisceau de rayonnement ⁴. en 2011, un micro-irradiateur a été installé dans le laboratoire d’imagerie préclinique de l’Université de Gand (Figure 1). Ce système est similaire à une radiothérapie humaine moderne pratique et permet une grande variété d’expériences précliniques, tels que la synergie des rayonnements avec d’autres thérapies, les schémas complexes de rayonnement et des études Poussée sous-objectif guidée par l’image.

Planification sur ces micro-irradiateurs du traitement repose sur la CT, ce qui équivaut à la planification des systèmes^14,15. Pour l’imagerie CT, un détecteur de rayons x embarqué est utilisé en combinaison avec le même tube à rayons x kV qui est utilisée pendant le traitement. L’imagerie CT est utilisé car il permet un positionnement précis des animaux et fournit les renseignements nécessaires pour les calculs de dose de rayonnement individuels via la segmentation. Toutefois, en raison du faible contraste des tissus mous dans CT d’imagerie, de tumeurs dans le cerveau des petits animaux, comme les gliomes de haut grade, ne peut pas être facilement délimitées. L’incorporation de l’imagerie multimodale est donc nécessaire pour une délimitation du volume cible précis. Par rapport aux CT, MRI fournit largement supérieur contraste des tissus mous. Cela le rend beaucoup plus facile de visualiser les limites de lésion qui seront traduira par une délimitation beaucoup mieux du volume cible, aidant à mieux irradier la lésion et éviter entourant les tissus, comme le montre Figure 2^{4, 16}. Un autre avantage est que l’IRM utilise des rayonnements non ionisants, à la différence de CT qui est à l’aide de rayonnements ionisants. Les principaux inconvénients de l’IRM sont les délais d’acquisition relativement longs et des coûts opérationnels élevés. Il est important de noter que l’IRM ne peut servir pour les calculs de dose, car ils ne fournissent pas les informations de densité électronique requis, bien que les progrès dans ce domaine, aussi avec le développement récent de M.-LINACS. À ce titre, un ensemble de données combinée CT/IRM est la méthode de choix pour la planification de l’irradiation des gliomes malins, contenant les informations requises pour le ciblage (IRM basée sur les volumes) et pour les calculs de dose (densité électronique axée sur le CT).

Pour diminuer l’écart entre les petite animale irradiation et clinique au quotidien, MRI a clairement besoin d’être intégré dans le flux de travail de la micro-irradiateur, nécessitant un enregistrement correct entre IRM et CT, ce qui est loin d’être négligeable. Dans cet article, notre protocole pour l’irradiation conformationnelle 3D guidée par MRI de F98 glioblastome chez le rat est discutée, qui a été récemment publié¹⁷.

Bien qu’intégrant CT et IRM dans le workflow de l’irradiateur-micro est un pas en avant dans la recherche de petits animaux irradiation, ces techniques d’imagerie anatomiques ne permettent pas toujours une définition complète du volume cible. Des changements pathologiques dans le cerveau sur le CT et IRM sont caractérisés par la teneur accrue en eau (oedème) et la fuite de la barrière hémato - encéphalique ou amélioration du contraste. Toutefois, les-l’amélioration du contraste et des zones hyper intense sur l’IRM pondérées en T2 ne sont pas toujours une mesure précise de l’étendue de la tumeur.Les cellules tumorales ont été détectés bien au-delà des marges d’amélioration du contraste¹². En outre, aucune de ces techniques peut identifier les parties plus agressives au sein de la tumeur, qui peut être responsable de la résistance thérapeutique et une récidive tumorale. Par conséquent, des informations complémentaires des techniques d’imagerie moléculaires comme animal peut avoir une valeur ajoutée pour RT cibler définition du volume car ces techniques permettent de visualiser les voies biologiques in vivo^{12,18, 19}.

En 2000, Ling et coll. a introduit le concept du volume cible biologique (BTV) en intégrant l’imagerie anatomique et fonctionnelle dans le workflow de radiothérapie, conduisant à ce qu’ils appelaient la radiothérapie conformationnelle multidimensionnelle²⁰. Cela crée la possibilité d’améliorer le ciblage en livrant une dose non uniforme à une région cible en utilisant par exemple des images de PET de dose. La plus utilisée pour la mise en scène de tumeur traceur PET et pour surveiller le traitement réponse est fluor-18 (¹⁸F) étiqueté fluorodésoxyglucose (FDG), qui visualise le métabolisme de glucose²¹. Cancer de la tête et du cou, les études antérieures ont montré que l’utilisation de ¹⁸F-FDG PET a conduit à une meilleure estimation du volume de tumeur réelle, telle que définie par les spécimens pathologiques, comparées avec CT et MRI²². Dans le cerveau primitif, où FDG n’est pas utile en raison du signal de fond très fort du cerveau normal, acides aminés, tels que ¹¹C-méthionine et, plus récemment, ¹⁸F-fluoroetthyltyrosine (FET), les tumeurs ont été étudiés pour GTV délimitation avec des différences souvent marquées entre acides aminés TEP et IRM à base GTVs²³. Cependant, aucun essai prospectif étudie la signification de cette découverte n’a été réalisée encore. Dans cette étude, nous avons choisi l’acide aminé traceur ¹⁸F-FET et l’hypoxie traceur ¹⁸F-fluoroazomycin-arabinoside (¹⁸F-FAZA). ¹⁸ F-FET et ¹⁸F-FAZA ont été choisis parce qu’une augmentation de l’absorption d’acides aminés est fortement corrélée avec le taux de prolifération des tumeurs GB, tandis que l’absorption d’une hypoxie PET-traceur est corrélée avec une résistance à de radiothérapie (chimio)^{18 , 23}. sous volume stimuler à l’aide de l’irradiateur-micro a été optimisé en donnant une dose de rayonnement supplémentaire à une partie définie par l’animal de la tumeur F98 GB chez les rats.

Protocole

L’étude a été approuvée par le Comité d’éthique pour l’expérimentation animale (DPE 09/23 et DCE 12/28). Tous les détails commerciaux se trouvent dans la Table des matières.

1. F98 GB Rat modèle cellulaire

1. Les cellules F98 GB, a obtenu de l’ATCC, en monocouches utilisant de Dulbecco milieu Eagle modifié, sérum de veau 10 %, 1 % la pénicilline, streptomycine 1 %, 1 % L-glutamine et 0,1 % amphotéricine b, de la culture et le placer dans un incubateur à CO₂ (5 % de CO₂ et 37 ° C).
2. Ensemencer les cellules de gliome dans le cerveau des rats Fischer F344 femelles (poids de 170 g).
   1. Utiliser des instruments stériles et porter des gants stériles en tout temps.
   2. Anesthésier les rats en injectant un mélange de kétamine 74 mg/kg et de 11 mg/kg intrapertioneally de xylazine (IP) avec une seringue à insuline (1 mL, 29 G). Confirmer l’anesthetization en l’absence de réponse pour le réflexe de retrait du membre. Immobiliser les rats dans un appareil stéréotaxique à l’aide de points de fixation pour nez et oreilles. Place un œil carbomer gel pour prévenir le dessèchement des yeux sous anesthésie.
   3. Râper le rat de la hauteur des yeux à l’arrière du crâne et désinfecter la peau avec la povidone iodée.
   4. Exposer le crâne à travers une incision médiane de cuir chevelu de 2 cm et faire un trou de 1 mm (diamantées) 2 mm postérieur et 2,5 mm latéral pour le bregma dans l’hémisphère frontal droit.
   5. Insérer une aiguille stereotactically guidée de l’insuline (29 G) et injecter 5 µL de la suspension cellulaire (20 000 cellules de F98 GB) 3 mm de profondeur à l’aide d’un contrôleur de pompe microseringue (paramètres : injecter (I50), débit 1 nL/s (001 SDN)).
   6. Retirer la seringue lentement et refermer l’incision avec de la cire de l’OS. Suture de la peau et désinfecter avec povidone-iode.
   7. Stabiliser la température du corps de l’animale après la chirurgie en utilisant une lampe rouge. Surveiller l’éveil du rat jusqu'à ce qu’il a repris connaissance suffisante pour maintenir le décubitus sternal. Ne pas retourner l’animal à la compagnie des autres animaux jusqu'à ce que complètement guéri. Garder tous les animaux dans des conditions contrôlées pour l’environnement (cycles normaux de lumière/obscurité 12 h, 20-24 ° C et humidité relative de 40 à 70 %) avec de l’eau et nourriture ad libitum. Assurez-vous de suivre de près les animaux en surveillant leur poids corporel, alimentation, prise d’eau et leur activité et un comportement normal. Utilisez une dose létale de pentobarbital sodique pour euthanasier les animaux (160 mg/kg), si on observe une diminution du poids corporel de 20 % ou lorsque le comportement normal détériore gravement (p. ex., manque de toilettage).

2. confirmation de la croissance tumorale

NOTE : Évaluer la tumeur croissance 8 jours après l’inoculation à l’aide de l’IRM pondérées en T2, MRI de renforcement du contraste dynamique (DCE-MRI) et renforcement du contraste de MRI pondérées en T1. Lorsque la tumeur atteint une taille de 2,5 x 2,5 x 2,5 mm³, sélectionnez le rat pour la thérapie.

1. Tout d’abord, connectez une aiguille de 30 G à un tube de 60 cm de longueur, qui est placé par voie intraveineuse dans la veine caudale latéral. Anesthésier les rats à travers un cône de nez à l’isoflurane 2 % mélangé avec de l’oxygène (0,3 L/min). Confirmer anesthetization lorsque les rats ne répondent pas au réflexe retrait du membre. Couvrir les rats avec une couverture chauffée et placez-les dans le lit de MRI. Utiliser un gel ophtalmique de carbomer pour prévenir le dessèchement.
2. Placer le lit dans le support avec une bobine de surface de cerveau rat fixe et le lit dans une bobine émettrice de 72 mm rat tout le corps.
3. Effectue une recherche d’alignement de piste suivie d’une analyse d’écho de spin pondérées en T2 pour évaluer la croissance tumorale. Détails de séquence T2-MRI : TR/TE 3661/37,1 ms 109 µm de résolution dans le plan isotrope, tranche épaisseur 600 µm, 4 moyennes, TA 9 min 45 s.
4. Si la tumeur est confirmée sur l’acquisition de pondérées en T2, injecter un agent de contraste contenant du gadolinium dans la tubulure intraveineuse placée (agent de contraste MRI ; 0,4 mL/kg) 30 s après le début de l’acquisition de DCE-MRI. Acquérir DCE-MRI pendant 12 min à l’aide d’un fast-bas angle tourné la séquence (FLASH) en une seule tranche (tranche 1 mm d’épaisseur). Utilisez une résolution spatiale dans le plan (312 µm²) et une résolution temporelle de 1,34 s.
5. À l’aide de l’outil d’analyse de séquence image, sélectionnez une région d’intérêt (ROI) dans la région de tumeur présumée pour tracer l’intensité du signal au fil du temps. Par la suite, analyser la forme de la courbe résultante de DCE pour confirmer la présence de glioblastome (Figure 3).
6. Enfin, acquérir une séquence contraste accentué pondérées en T1 écho de spin. Détails de séquence T1-MRI : TR/TE 1539/9,7 ms, 117 µm de résolution dans le plan isotrope, tranche épaisseur 600 µm 3 moyennes, TA 4 min 15 s. typique contraste accentué M. pondérées en T1 images sont affichées à la Figure 2.
7. Après avoir finalisé les séquences pondérées en T1, l’animal peut réveiller sous surveillance continue, jusqu'à ce qu’il regagne la pleine conscience.

3. l’imagerie multimodalité pour la sélection du Volume cible

Remarque : Pour pouvoir effectuer le guidage MRI 3D irradiation conformationnelle du rat F98 GB modèle avec volume sous guidage PET stimuler, 3 imagerie besoin de modalités à accomplir. Tout d’abord, injecter le radiotraceur, puis effectuer le MRI au cours de l’incorporation du traceur, effectuer ultérieurement une acquisition statique de PET et un traitement planification CT.

1. Anesthésier les animaux à l’aide d’un cône de nez à l’isoflurane 2 % mélangé avec de l’oxygène (0,3 L/min). Confirmer anesthetization lorsque les rats ne répondent pas au réflexe retrait du membre. Utilisez un gel de carbomère ophtalmique pour prévenir le dessèchement tandis que sous anesthésie.
2. Insérer un cathéter (26 G) dans la veine caudale, ce qui permet l’injection du traceur radioactif de 37 MBq de PET dissoute dans une solution saline de 200 µL. Injecter soit ¹⁸F-FET ou ¹⁸F-FAZA, 30 min ou 2 h avant l’acquisition de PET, respectivement.
3. Injecter par voie intraveineuse agent de contraste de MRI (0,4 mL/kg) dans la veine caudale utilisation du cathéter 15 min avant l’acquisition de l’animal.
4. Placer les rats sur un interne fait le lit de la multimodalité et les fixer avec des attaches auto-agrippante, maintenir une position fixe au cours de l’imagerie et micro-irradiation (Figure 1).
5. Difficulté trois marqueurs de multimodalité (capillaires remplis d’eau), dessous, au-dessus et sur le côté droit du crâne. Placer le rat, toujours fixé sur le lit de la multimodalité, du scanner MRI in animaux, difficulté de la bobine surface de cerveau de rat et ce set-up dans une bobine de dans tout l’organisme émetteur de rat de 72 mm. Effectue une recherche d’alignement de piste suivie d’une séquence de contraste accentué pondérées en T1 écho de spin.
6. Le transport de l’animal pour effectuer une ¹⁸F-FET ou ¹⁸acquisition de F-FAZA PET. Acquérir une TEP statique de 30 min en mode liste. Scan devrait être acquise soit 30 min après l’injection de ¹⁸F-FET ou 2 h après l’injection de ¹⁸F-FAZA.

Reconstruire tous les tomographies TEP dans une matrice de 200 × 200 × 64 en un algorithme Maximum vraisemblance Expectation Maximization (MLEM) 2D à l’aide de 60 itérations et une taille de voxel de 0,5 × 0,5 × 1,157 mm.

Placez l’animal, toujours fixé sur le lit de la multimodalité, sur un support en plastique fixé sur le tableau de positionnement robotique quatre axes de l’irradiateur-micro. Effectuer un balayage de CT de planification de traitement haute résolution en utilisant un filtre en aluminium de 1 mm et un détecteur à écran plat 20 x 20 cm (1 024 x 1 024 pixels) amorphe Si. Reconstruire les images de CT avec une taille de voxel isotropes de 0,2 mm. fixer la tension du tube et tube actuel à 70 kV et 0,4 mA, respectivement. Acquisition d’un total de 360 projections sur 360 °.

4. planification du traitement RT

1. Utiliser le traitement préclinique planification système (PCTPS) pour la planification du traitement. Importer la planification CT dans la PCTPS et manuellement des segments de cette image de CT en trois classes de différents tissus : OS, tissus mous et l’air. Cette segmentation manuelle repose sur la définition des trois différents seuils de gris-valeur sur le CT de planification. Ces seuils de gris-valeur sélectionnées manuellement doivent être choisies telles que l’air dans le cerveau est absent et que l’épaisseur osseuse du crâne n’est pas nulle. Une fois ces seuils sont définis, la densité matérielle est attribuée par la PCTPS des os, des tissus mous et l’air (Figure 4).
2. Si seulement les conseils de MRI sont nécessaires, charger l’IRM et co s’inscrire avec le CT de planification à l’aide de la PCTPS.
   1. Utilisez des transformations de corps rigide (trois translations et trois rotations), les marqueurs de la multimodalité et le crâne. En superposant l’intensité du signal accrue du crâne sur CT avec signal noir sur l’IRM, une fusion précise peut être obtenue (Figure 5).
   2. Sélectionnez la cible pour l’irradiation dans le centre de la tumeur amélioration de contraste à l’IRM pondérées en T1, voir Figure 6 et Figure 7.
3. Lorsque des informations supplémentaires de PET doivent être incluses, comprennent un enregistrement co CT/MRI/PET en utilisant le logiciel de quantification d’images biomédicales (BIQS).
   1. Utilisez l’outil de contournage dans le BIQS pour atteindre la fusion d’image TEP/IRM (Figure 8). Après co-enregistrement, sélectionnez la cible dans le centre de l’absorption accrue de traceur de PET dans la BIQS (Figure 9) et entrer les coordonnées manuellement dans le PCTPS en utilisant les transformations suivantes : X → -X et Y → Z → Z -Y.
   2. Sélectionnez la dose prescrite, le nombre d’arcs, position de l’arc, plage de rotation des arcs et la taille de collimateur (Figure 10).
   3. Pour guidage de MRI RT, utilisez les paramètres suivants : une dose prescrite de 20 Gy, 3 arcs positionnés au canapé angles de-45 °, 0 ° et 45 ° avec des rotations d’arc de 120 ° et une taille de collimateur de 5 x 5 mm.
   4. Pour PET-MRI-guidé RT, utilisez les paramètres suivants : une dose prescrite de 20 Gy à l’aide des 3 arcs et un collimateur de 5 x 5 mm et extra 5 Gy pour Sub volume Booster à l’aide de 3 arcs non coplanaires et un collimateur de 1 x 1 mm. Sélectionnez une rotation de 120 ° pour tous les arcs tout en changeant la position du divan (-45 °, 0 ° et 45 °).
4. Calculer la répartition de la dose au sein de l’animal et les paramètres de réalisation de faisceau pour livrer la dose prescrite à la cible à l’aide de la PCTPS. Avant irradiation réelle, tester les rotations de l’arc aux positions canapé différentes afin d’éviter toute collision lors de l’irradiation.
5. Pour l’irradiation réelle, sélectionnez un filtre de 0,15 mm cuivre, régler la tension des rayons x à 220 kV, définir la radiographie courant pour 13 mA et la position du collimateur de droite sur le portique. Exécuter la RT en transférant les paramètres de livraison approprié de faisceau de le PCTPS à l’irradiateur-micro.
6. Au cours de ces procédures, le rat est maintenu sous anesthésie isoflurane continue (2 % isoflurane, mélangé avec de l’oxygène 0,3 L/min). Après l’exécution de l’arc en dernier, l’animal peut réveiller sous surveillance continue, jusqu'à ce qu’il regagne la pleine conscience.

5. dose Volume histogrammes (DVHs)

Remarque : Pour comparer la dose réelle envoyée pour les volumes cibles de tumeur et le tissu cérébral normal environnant, calculer DVHs.

1. Dessiner un volume d’intérêt (VOI) autour de la tumeur et le cerveau normal sur les pondérées en T1 contraste accentué M. images pour calculer la dose moyenne, maximale et minimale (Figure 11).
2. Comme un substitut pour la maximale, moyenne et la dose minimale pour le volume de la tumeur et le volume de tissu cérébral normal, calculer la D₂, D₅₀et D₉₀. D représente la dose reçue par x % du volume, précédé de l’indice et peut être dérivé du DVH qui en résulte.

6. TMZ et chimiothérapie Sham

1. Pour simuler le traitement du glioblastome chez les patients, administrer une chimiothérapie concomitante à l’aide d’injections d’IP de 29 mg/kg, que TMZ dissous dans une solution saline avec 25 % de diméthylsulfoxyde (DMSO) une fois par jour pendant 5 jours à partir du jour de l’irradiation^{24, 25}. utilisation 1 mL, seringue à insuline à administrer l’injection 29 G.
2. Pour le groupe témoin, administrer l’injection de l’étape 6.1 sans TMZ.

Résultats

Pour imiter la méthodologie de traitement humain pour l’irradiation des glioblastomes dans un modèle préclinique, inclusion de radiothérapie guidée par MRI a été nécessaire. À l’aide de la PCTPS et l’interface micro-irradiateur, nous étions en mesure d’irradier F98 glioblastome chez les rats avec plusieurs arcs non coplanaires conformes ciblant la région contraste accentué le MRI pondérées en T1,¹⁷. Les transformations du corps rigide en combi...

Discussion

Pour parvenir à une irradiation exacte de la cible glioblastome de tumeur dans le cerveau de rat, bord conseils de CT de l’irradiateur-micro n’était pas suffisante. Les tumeurs cérébrales sont à peine visibles à cause du contraste des tissus mous insuffisante, même si l’amélioration du contraste serait utilisée. Par conséquent, MRI doit être inclus pour permettre l’irradiation plus précise. À l’aide d’une acquisition de Monsieur séquentielle sur un système de T 7 et une acquisition de CT sur la...

matériels

Name	Company	Catalog Number	Comments
GB RAT model
F98 Glioblastoma cell line	ATCC	CRL-2397
Fischer F344/Ico crl Rats	Charles River	N/A	http://www.criver.com/products-services/basic-research/find-a-model/fischer-344-rat
Micropump system	World Precision Instruments	UMP3	Micro 4: https://www.wpiinc.com/products/top-products/make-selection-ump3-ultramicropump/#tabs-1
Stereotactic frame	Kopf	902	Model 902 Dual Small Animal Stereotaxic frame
diamant drill	Velleman	VTHD02	https://www.velleman.eu/products/view/?id=370450
Bone wax	Aesculap	1029754	https://www.aesculapusa.com/products/wound-closure/hemostatic-bone-wax
Insulin syringe Microfine	Beckton-Dickinson	320924	1 mL, 29G
InfraPhil IR lamp	Philips	HP3616/01
Ethilon	Ethicon	662G/662H	FS-2, 4-0, 3/8, 19 mm
Name	Company	Catalog Number	Comments
Cell culture
DMEM	Invitrogen	14040-091
Penicilline-streptomycine	Invitrogen	15140-148
L-glutamine	Invitrogen	25030-032
Fungizone	Invitrogen	15290-018
Trypsin-EDTA	Invitrogen	25300-062
PBS	Invitrogen	14040-224
Falcons	Thermo Scientific	178883	175 cm2 nunclon surface, disposables for cell culture with filter caps
Cell freezing medium	Sigma-aldrich	C6164	Cell Freezing Medium-DMSO, sterile-filtered, suitable for cell culture, endotoxin tested
Name	Company	Catalog Number	Comments
Animal irradiation
Micro-irradiator	X-strahl	SARRP
software for irradiation	X-strahl	MuriPlan	pre-clinical treatment planning system (PCTPS), version 2.0.5.
Name	Company	Catalog Number	Comments
Small animal PET
microPET system possibility 1	Molecubes	B-Cube	http://www.molecubes.com/b-cube/
microPET system possibility 2	TriFoil Imaging, Northridge CA	FLEX Triumph II	http://www.trifoilimaging.com
PET tracers	In-house made		18F-FDG, 18F-FET, 18F-FAZA, 18F-Choline
Name	Company	Catalog Number	Comments
Small animal MRI
microMRI system	Bruker Biospin	Pharmascan 70/16	https://www.bruker.com/products/mr/preclinical-mri/pharmascan/overview.html
Dotarem contrast agent	Guerbet		MRI contrast agent, Dotarem 0,5 mmol/ml
rat whole body transmitter coil	Rapid Biomedical	V-HLS-070
rat brain surface coil	Rapid Biomedical	P-H02LE-070
Water-based heating unit	Bruker Biospin	MT0125
30 G Needle for IV injection	Beckton-Dickinson	305128	30 G
PE 10 tubing (60 cm/injection)	Instech laboratories, Inc	BTPE-10	BTPE-10, polyethylene tubing 0.011 x .024 in (0.28 x 60 mm), non sterile, 30 m (98 ft) spool, Instech laboratories, Inc Plymouth meeting PA USA- (800) 443-4227- http://www.instechlabs.com
non-heparinised micro haematocrit capillaries	GMBH	7493 21	these capillaries are filled with water to create markers visible on MRI and CT
Name	Company	Catalog Number	Comments
Consumables
isoflurane: Isoflo	Zoetis	B506	Anaesthesia
ketamine: Ketamidor	Ecuphar		Anaesthesia
xylazine: Sedaxyl	Codifar NV		Anaesthesia
catheter	Terumo	Versatus-W	26G
Temozolomide	Sigma-aldrich	T2577-100MG	chemotherapy
DMSO	Sigma-aldrich	276855-100ML
Insulin syringe Microfine	Beckton-Dickinson	320924	1 mL, 29G
Name	Company	Catalog Number	Comments
Image analysis
PMOD software	PMOD technologies LLC	PFUS (fusion tool)	biomedical image quantification software (BIQS), version 3.405, https://www.pmod.com/web/?portfolio=22-image-processing-pfus
Name	Company	Catalog Number	Comments
Anesthesia-equipment
Anesthetic movabe unit	ASA LTD	ASA 0039	ASA LTD, 5 valley road, Keighley, BD21 4LZ
Oxygen generator	Veterinary technics Int.	7F-3	BDO-Medipass, Ijmuiden