Analysant l’apprentissage Spatial et comportement Prosocial chez la souris à l’aide de la Maze de Barnes et paradigmes de la demoiselle en détresse

Résumé

Ce protocole mesure spatiale d’apprentissage et de mémoire à l’aide du labyrinthe de Barnes. Un nouveau paradigme de demoiselle en détresse sert à évaluer l’activité locomotrice et comportement prosocial chez la souris.

Résumé

Le labyrinthe de Barnes est une mesure fiable de l’apprentissage spatial et de la mémoire qui ne nécessite pas de restriction alimentaire ou l’exposition à des stimuli extrêmement stressants. Le labyrinthe de Barnes peut également évaluer les autres comportements de souris, tels que de la motivation générale à s’échapper de la plate-forme du labyrinthe et le comportement exploratoire. Le labyrinthe de Barnes peut mesurer si une mutation génétique ou la variable d’environnement peut influer l’acquisition et la rétention de la mémoire spatiale, ainsi que fournir des informations sur la stratégie de recherche utilisée par les souris. Ici, nous utilisons le labyrinthe Barnes pour détecter un déficit de mémoire chez les souris adultes suite à un événement d’exposition unique éthanol du développement. Le paradigme de la demoiselle en détresse nouvellement décrit expose une souris mâle dans une souris femelle, pris au piège dans une chambre dans le champ ouvrir de la centre de l’arène. Il offre la possibilité pour la souris socialement, répondre à la femelle piégée et présenter un comportement prosocial. Le paradigme de la demoiselle en détresse peut également être utilisé pour examiner le comportement de la souris dans une nouvelle arène et mesure l’activité locomotrice. Fois le labyrinthe de Barnes et les protocoles de la demoiselle en détresse nécessitent peu d’investissement financier et la plupart des aspects des essais peuvent être construits de fournitures de laboratoire commun. Ces outils flexibles et accessibles peuvent également servir à détecter les changements de comportement au cours du développement.

Introduction

Ce protocole vise à mesurer l’apprentissage spatial et la mémoire chez les souris en utilisant le labyrinthe Barnes ainsi que la sensibilité sociale et la locomotion en utilisant le paradigme de la demoiselle en détresse. Couramment utilisé des tests d’apprentissage et la mémoire spatiales pour rongeurs incluent le labyrinthe de bras radial, qui mesure la capacité de la souris pour trouver de la nourriture cachée dans un des bras d’un appareil à rayons multiples, et le labyrinthe d’eau Morris, qui met une souris dans une grande cuve ou flaque d’eau et évalue le temps nécessaire pour trouver une plate-forme cachée sous l’eau. En règle générale, la formation pour ces paradigmes s’étend sur multiples essais et permet la mesure des deux taux d’acquisition et de rétention grâce à court terme et des essais de mémoire à long terme de l’apprentissage.

Bien que le labyrinthe radial-bras et le labyrinthe aquatique Morris sont des moyens fiables pour tester la mémoire chez les rongeurs, elles présentent des complications pour certains chercheurs. Les deux labyrinthes utilisent privation ou forts stimulus aversif comme renfort¹. Le labyrinthe de bras radial utilise la privation de nourriture pour s’assurer que les rongeurs sont bien motivés pour trouver une récompense alimentaire. Dans le labyrinthe de l’eau de Morris, les effets du stress induit par une nage forcée peuvent modifier les résultats dans la souris².

Le labyrinthe de Barnes est une tâche de la conscience spatiale alternative qui nécessite des rongeurs apprendre la position d’un trou afin d’échapper à la surface du labyrinthe lumineux et ouverts³. Faible stimulation aversive (lumineux ou sonore) est ensuite appliquée pour augmenter la probabilité que les souris seront échappera de la plate-forme. Le labyrinthe de Barnes n’exige pas la privation de nourriture, donc la quantité de préparation animaux est moindre que dans le dédale de bras radial. Il peut être utilisé sans conflit par les chercheurs qui étudient les comportements ou les molécules associées à la manger, régulation hormonale ou voies hypothalamiques.

Le labyrinthe de Barnes a également des avantages sur le labyrinthe de l’eau de Morris. C’est moins stressant que le labyrinthe d’eau Morris, entraînant des concentrations moins élevées de corticostérone souris⁴. En outre, il est beaucoup plus simple à monter et nécessite un espace moins consacré pendant la procédure test et le stockage.

L’essai de la demoiselle en détresse est une simple expérience de deux parties qui peut évaluer l’activité locomotrice suivie de comportement prosocial. Le dosage de la demoiselle en détresse est conçu pour évaluer les comportements exploratoires et sensibilité sociale d’un rongeur male en réponse à un rongeur femelle piégé. Une méthode couramment utilisée pour évaluer la sociabilité (ainsi que la préférence pour la nouveauté sociale) est l’utilisation du test de sociabilité de trois compartiments de Crawley, qui évalue le libre choix d’une souris de passer du temps près ou loin des autres souris⁵.

Similaire au test de sociabilité de trois compartiments de Crawley, l’essai de demoiselle en détresse mesure également libre choix concernant la façon de passer du temps en présence d’une autre souris, mais il fournit également des mesures pour les aspects plus profondes du fonctionnement social : 1) dans le Demoiselle en détresse test, la souris femelle piégée se tient au centre d’un champ ouvert, donc aversion potentiels du mâle dans un champ est piquée contre son lecteur à explorer ou enquêter sur une femme en détresse conspécifique socialement. 2) le modèle de la demoiselle en détresse fournit également un moyen d’évaluer le comportement prosocial et empathique en réponse à la souris piégée, ce qui n’a pas été explorée fréquemment chez les souris.

L’empathie animale est certainement observables et mesurables, bien que pas beaucoup de paradigmes existent à cet effet. Par exemple, chez le rat, un compagnon de cage piégés peut induire un état de motivation prosocial, où les rats travailleront pour libérer l’animal pris au piège. En fait, des rats choisira aider l’animal pris au piège, même avant d’ouvrir un conteneur similaire contenant une collation au chocolat, puis accéder au chocolat et partagez-la avec le rat nouvellement libéré⁶.

Mesures de l’empathie chez les souris comportent généralement le fait d’infliger de la douleur ; en effet, les souris qui regardent les autres souris de douleur sont plus sensibles à la douleur se^7,8. Stress de contrainte est un phénomène caractérisé chez les rongeurs et s’accompagne de choc afin d’examiner les réactions de stress, comme une mesure de l’empathie chez les souris^9,10.

Il y a des considérations éthiques associées à la douleur induite ou choc, donc stress induisant des solutions de rechange sont nécessaires. Nous avons développé le paradigme de la demoiselle en détresse comme une mesure du comportement empathique en l’absence de douleur ou de traitement de choc. Les souris piégées dans notre protocole de demoiselle en détresse montrent des signes évidents de détresse après seulement quelques instants, comme on ne peut faire demi-tour dans le petit récipient, et pourtant ils sont sain et saufs, tout en offrant aux autres souris répondre à leur détresse.

Pour commencer l’évaluation de la demoiselle en détresse, une souris mâle est placée dans une grande arène roman contenant un petit cylindre central vide. Les comportements exploratoires sont enregistrées pendant plusieurs minutes, y compris combien de sections de l’arène est croisés et combien de temps est passé dans la zone centrale ouverte. Cette méthode fournit un moyen rapide et facile d’exclure déficits locomoteurs comme un facteur de confusion potentielle dans une situation d’apprentissage nécessitant un mouvement coordonné pour la réussite. Il fournit également une mesure élémentaire de combien l’aversion pour le plein champ centre est présente. Ces deux mesures pourraient influencer la performance de labyrinthe de Barnes.

Après l’exploration initiale, le mâle est retiré de l’arène et une souris femelle est placée dans un cylindre fermé, petit clair central (similaire à celle utilisée pour recueillir le sang des souris). Ensuite, la souris mâle originale est réintroduite dans l’arène et comportement exploratoire est à nouveau marqué. Le paradigme de la demoiselle en détresse évalue si une souris est intéressée par une interaction sociale basée sur les changements dans les comportements lorsqu’une femme piégée est présente (marqué par le temps consacré à la place du centre et le nombre d’épisodes de creuser) et si le la souris présente un comportement prosocial vers la femelle piégé (marqué par la quantité d’enquêtes de cylindre et événements contact avec la femelle piégée). Le dosage de la demoiselle en détresse peut être utilisé pour mesurer une propension à la nouveauté sociale (similaire au test de sociabilité de trois compartiments de Crawley) selon si les chercheurs piéger une souris familière ou roman.

Ensemble, le labyrinthe de Barnes et expériences de la demoiselle en détresse permettent l’évaluation exacte des souris capacités d’apprentissage et de la sensibilité sociale en l’absence de stimuli extrêmement stressants. Comme avec tous les tests comportementaux, ces expériences doivent être effectuées avec une grande sensibilité envers l’expérience animale, réduisant au minimum l’inconfort ressenti par l’animal.

Comme la plupart des labyrinthes, des différences dans l’activité locomotrice peuvent influencer la performance sur le labyrinthe de Barnes, donc les chercheurs devraient aussi évaluer l’activité locomotrice, surtout lorsque vous utilisez le labyrinthe Barnes pour évaluer l’apprentissage chez les souris porteuses de mutations qui peuvent altérer le mouvement (telles que ceux trouvés dans des modèles murins de la maladie de Huntington, ou ceux exposés à des toxines qui peuvent provoquer de l’hyperactivité ou retarder le mouvement, comme l’éthanol). En outre, labyrinthe et chambre les surfaces doivent être soigneusement nettoyés et literie changée entre chaque animal afin d’éviter le cue de parfum confond.

Ce qui est important, tous les matériaux peuvent être fabriqués sur place avec peu d’investissement financier et le faible encombrement physique de ces tests signifie que ces expériences peuvent être répliqués dans presque tous les milieux, ce qui permet une grande flexibilité. Ce type d’accessibilité permet de bonne science devant être célébré dans les petits établissements disposant de ressources limitées ou dans des situations où les données pilotes doivent percevoir rapidement en l’absence d’un soutien substantiel.

Protocole

Toutes les méthodes décrites ici ont été approuvées par l’animalier institutionnel et utilisation Comité (IACUC) de Hampden-Sydney College ou Randolph-Macon College (où que certains travaux ont été réalisés auparavant).

1. base logement de souris

1. Maison des souris dans des cages en plastique avec fond solide et côtés et une couche de literie molle et de matériaux comme le déchiquetage de papier de nidification. Utiliser la literie qui est composée d’épis de maïs broyés ou copeaux de bois et faire en sorte que la literie est changée régulièrement pour l’assainissement.
2. Fournir l’accès à la nourriture et l’eau ad libitum. Le haut de la cage en plastique abrite une trémie d’alimentation. Répartir les boulettes souris correctement formulé la trémie d’alimentation et fournir un distributeur d’eau. Veiller à ce que le dessus de la cage dispose d’un filtre à air pour protéger les souris contre des contaminants extérieurs.
3. Maintenir les rythmes circadiens naturels des souris en suivant un cycle lumière-obscurité de 12 heures dans l’établissement de logements. Effectuer des tests comportementaux à la même heure, idéalement pendant cycle foncé de l’animal, comme pendant les heures du soir.
   Remarque : Il faut distinguer la souris dans le logement. Diverses méthodes pour souris distinctifs sont disponibles, tels que les poinçons de l’oreille, les marques auriculaires et des marquages de queue.

2. tests de labyrinthe Barnes : Construction

1. Obtenir une planche de bois circulaire qui est de 120 cm de diamètre.
2. Couper 20 trous circulaires (4,5 cm de diamètre) autour du périmètre du cercle. Positionner chaque trou pour être 2,5 cm loin du bord du labyrinthe et 13 cm en dehors de trous voisins.
3. Les surfaces lisses et les peindre blanc brillant (une couleur vive est recommandée).
4. Désigner un côté de l’organe de labyrinthe pour insertion de petite tasse crochets à peu près 2-3 cm de chacun des 20 trous et placer deux crochets pour chaque trou (un de chaque côté de chaque trou).
5. Utiliser des disques noirs peu profonds (plastique) pour recouvrir les trous sur le côté du labyrinthe avec des crochets. Utilisez crochets pour fixer des bandes de caoutchouc épais afin d’y pour tenir les disques sur le fond du labyrinthe.
6. Fixer solidement le labyrinthe Barnes 120 cm au-dessus du sol et loin des autres objets de même hautes comme les tables ou chaises. Une boîte ou un tabouret peut être utilisé pour soutenir le milieu du labyrinthe.
7. Placez les grandes affiches blanches avec une seule forme sur chaque mur (triangle, cercle et croix) comme repères extra-labyrinthe sur 3 côtés du labyrinthe. Maintenir les affiches sur les murs dans le labyrinthe pour chaque essai.
8. Le dernier côté du labyrinthe, mis en place un solid rideau noir pour cacher les observateurs afin que les données peuvent être enregistrées avec précision sans les chercheurs perceptible à la souris sur le labyrinthe.
9. Suspendre une caméra vidéo sur la scène avec une vue d’ensemble de la surface entière de labyrinthe.
10. Nettoyer toutes les surfaces du labyrinthe (disques noirs et zone cible inclus) avec de l’eau puis une solution d’éthanol à 70 % avant et après chaque essai de souris.
11. Placer une source lumineuse à 100 W 25 cm au centre du labyrinthe (tournant marche/arrêt à l’arrivée du procès) et assurez-vous d’avoir les disques et les crochets vers le sol.
    Remarque : Toutes les autres lumières dans la salle doivent être éteint au cours des essais. L’ajout d’un fabricant de bruit ultrasonique accroché à côté de 100 W light est recommandé. Il marche/arrêt tourner à l’arrivée de chaque essai.

3. Barnes labyrinthe essais : procédure

Remarque : Assurez-vous que tous les composants de labyrinthe sont nettoyés avec l’eau et 70 % de solution d’éthanol avant et après chaque essai, permettant de temps à sécher complètement avant l’essai de curriculum vitae. Soyez sûr d’avoir nettoyage fournitures prêt ainsi que les minuteries pour les essais.

1. Toutes les souris dans les groupes de la maison tout en utilisant une méthode d’identification fiable. Gardez la souris à l’extérieur de la salle d’examen quand ils ne fonctionnent pas activement sur le labyrinthe. C’est pour s’assurer qu’ils ne subissent pas de la crécelle ultrasonique prématurément.
2. Gérer les souris en ramassant doucement et leur détention de la base de la queue, les pattes tenus en main.
3. Pour la formation, ont les souris courir sur le labyrinthe quotidienne fois par jour pendant 7 jours d’affilée pour évaluer l’acquisition/apprentissage.
   Remarque : Un seul essai à long terme peut s’effectuer à une date ultérieure afin d’évaluer la mémoire/rétention. Le protocole actuel formé adolescents souris commençant à jour après la naissance 32 et un essai de longue durée a été réalisé chez l’adulte à l’âge de 4 mois.
4. Répartissent de manière aléatoire chaque souris vers un trou cible à utiliser tout au long de la période d’essai. Les trous peuvent être étiquetés 1-20 sur le fond du labyrinthe ou à l’extérieur du périmètre labyrinthe, où ils ne sont pas visibles à la souris dans le labyrinthe.
5. Remplacer le disque assigné trou avec une petite boîte noire (23 x 11 cm). Attachez-le fermement pour le labyrinthe de Barnes à l’aide de bandes de caoutchouc reliés aux crochets de la plus proche.
   Remarque : La zone cible est peu profonde, suffisamment pour que la souris peut facilement descendre dedans ou contient une étape pour vous assurer que la souris n’a pas à sauter dedans.
6. Placez votre souris sur le centre du labyrinthe sous une tasse s’acclimater pendant 30 secondes jusqu'à ce que le test commence. Lancer l’enregistrement vidéo.
7. Allumez le bruiteur léger et ultrasons. Soulever la coupe par un mécanisme en chaîne afin d’éviter la polarisation de la position initiale de l’animal. Démarrer un timer et s’asseoir derrière le rideau d’observer.
8. Après la souris entre dans le trou de la cible, recouvrir le trou avec la même tasse opaque utilisée au début du procès ou un liant et éteindre le bruiteur ultrasonique. Si la souris n’est pas entré la cible une fois 5 minutes écoulées, corral la souris dans le trou de la cible.
   1. S’assurer que la souris entre dans le trou. Lorsque la souris est à l’intérieur de la zone cible, recouvrir le trou et éteindre le bruiteur. Laissez la souris pour rester dans la zone cible pendant une minute non perturbée.
9. Bien que le trou cible restera constant pour chaque souris tout au long de la période de formation, exécutez souris dans un ordre aléatoire chaque jour pour s’assurer qu’ils ne suivent pas tous cues/parfums à gauche de la souris précédente.

4. Barnes labyrinthe tests : Analyse des données

1. Au cours des essais de labyrinthe Barnes, record qui suit chronométré données : temps total passé sur le labyrinthe, le temps de rechercher la cible et le temps d’entrer dans le trou de la cible si la cible est entrée.
2. Suivre le mouvement général de la souris pour déterminer le nombre d’erreurs (nombre de trous incorrects exploré) avant et après la cible est trouvée. Enregistrent aussi la distance entre le trou de la cible et le premier trou explorée (la distance est mesurée en nombre de trous de suite), ainsi qu’un remarquable comportement de toilettage.
3. Suivre les déplacements de chaque animal sur un morceau de papier avec un diagramme du labyrinthe au cours de chaque essai et utilisez-la pour analyser les stratégies de recherche, mais aussi de déterminer le nombre de trous qui ont été explorées dans le quadrant en face de la cible. Analyse vidéo permet de confirmer les chemins d’accès.

5. demoiselle-en-détresse essais : construction de la chambre de retenue

1. Couper un cylindre transparent d’une longueur égale à ¾ de la longueur de la souris femelle de la base de la queue à la pointe du nez. S’assurer que les dimensions du cylindre sont telles que la souris placée à l’intérieur ne peut pas tourner autour.
   NOTE : Nous avons coupé l’extrémité du cône d’un tube de 50 mL conique vers le bas pour faire un tube de 4 cm de longueur pour 1 mois souris et un longueur de 8 cm tube depuis 4 mois souris.
2. Cap les deux extrémités du cylindre, telle que l’un chapeaux de peut être enlevé et remis en place. Percer des trous de 3-4, chacun, environ 0,5 cm dans chaque bouchon. Assurez-vous que les trous sont assez grands pour permettre au nez-toucher entre souris et¹²de la respiration.
   Remarque : Par ailleurs, un dispositif de retenue de la souris pendant la collecte de sang peut être utilisé.

6. demoiselle-en-détresse essais : préparation de l’arène

1. Veiller à ce que l’arène est une boîte carrée en plastique topless opaque de 38 x 38 cm avec parois de 19 cm. Remplir uniformément avec la litière de maïs jusqu'à une hauteur d’environ 2,5 cm.
   Remarque : La literie de l’épi de maïs fait creuser des événements plus faciles à détecter.
2. Suspendre une caméra vidéo sur l’arène afin que l’intégralité de l’arène est en vue.

7. demoiselle-en-détresse tests : mesure du comportement exploratoire

1. Placez la chambre fermée et vide le stress dans le centre de l’arène.
2. Commencez l’enregistrement avec la caméra suspendue.
3. Sélectionnez une souris mâle. Si les souris sont marqués pour identification, notez identité de cet homme ; Si ce n’est pas le cas, marquent cette souris afin qu’il peut être distingué après son retour à la cage.
4. Placez délicatement la souris mâle sous une tasse dans le coin inférieur gauche dans l’arène. Après 30 secondes, retirer la coupe par un mécanisme de chaîne.
5. Laissez la souris Explorer pendant 10 min, en prenant soin de rester en dehors de son champ de vision pendant l’enregistrement. À la fin des 10 min, retirez la souris de l’arène et retourner à une cage de rétention pour les prochaines 5 min¹².
6. Arrêter l’enregistrement et enregistrer le fichier vidéo avec un identificateur approprié.

8. demoiselle-en-détresse tests : mesure de la sensibilité sociale

1. Utiliser la même configuration arena et enregistrement que dans la mesure du comportement exploratoire.
2. Sélectionnez une souris femelle. Si les souris sont marqués pour identification, notez identité de cette femelle ; Si ce n’est pas le cas, marquent cette souris afin qu’elle se distingue lorsqu’il est renvoyé à la cage.
   Remarque : Une même portée, compagnon de cage ou nouvelle souris peut être utilisée, selon la question de recherche. Si plusieurs essais sont en cours, conserver le type de relation entre tous les essais.
3. Maintenez la souris femelle doucement de la base de la queue, ou de retenue de la nuque, si nécessaire et abaissez-la dans la chambre de retenue. Fermer l’extrémité ouverte derrière elle et s’assurer qu’il est impossible de faire demi-tour.
   Remarque : Pensez à porter des gants résistant à la morsure, car la souris femelle sera résistante à entrer dans la chambre de retenue.
4. Commencez l’enregistrement avec la caméra suspendue.
5. Placer la chambre de retenue avec la souris femelle piégée à l’intérieur dans le centre de l’arène de l’empathie et laisser la femelle s’acclimater pendant 10 min. Prendre soin de rester hors de champ de la femelle.
6. Après que la souris femelle a été dans la chambre de retenue pendant 5 min, placer la souris mâle marquée dans l’arène de l’empathie en utilisant le même processus qu’avant. Laissez la souris mâle un 5 min supplémentaire explorer la scène, encore une fois, en prenant soin de rester en dehors du champ de vue des souris.
7. Arrêter l’enregistrement et enregistrer le fichier vidéo avec un identificateur approprié.
8. À la fin de la 5 min, retirez les deux souris de l’arène et les placer dans leurs cages. Remplacer la litière de maïs et assainir l’arène et la chambre de stress avec de l’éthanol 70 %¹².

9. demoiselle-en-détresse tests : analyse des données

1. Logiciel de suivi peut être utilisé, mais la vidéo peut également être analysée manuellement. Une fois que le fichier vidéo est visible sur l’ordinateur, superposer une feuille transparente sur l’écran et définir la place de l’arène à l’aide d’un marqueur. Diviser le carré de l’arène en neuf compartiments égaux.
2. Examiner les données vidéo pour les 5 premières minutes de la mesure initiale exploratoire. Noter le nombre de compartiments traversés (le comportement de l’activité locomotrice et d’étude), le temps passé dans le centre du carré de l’arène (aversion de plein champ), nombre de creuser et de toilettage des épisodes et nombre de fois que la souris a touché la retenue vide Centre chambre.
   NOTE : Notation n’est pas fait pour le second 5 min d’exploration initiale de 10 minutes du mâle, ni pendant le 10 min, la femelle est pris au piège dans la chambre centrale en l’absence du mâle.
3. Examiner les données vidéo pendant le 5 min de la mesure de la sensibilité sociale immédiatement après que le mâle est réintroduit dans l’arène avec la femelle piégée. Enregistrer les données mêmes en ce qui concerne la mesure initiale exploratoire, mais en outre enregistrer le nombre de fois la souris mâle a touché le nez avec la souris femelle piégée.

Résultats

Le labyrinthe de Barnes

Pour illustrer comment le labyrinthe Barnes peut être utilisé, nous avons examiné si une seule exposition au début de l’éthanol a provoqué une différence dans l’apprentissage au cours du développement chez la souris. Des souris C57Bl6/J ont été soit injectés avec une solution d’éthanol 2,5 g/kg (n = 8) ou avec une solution saline (n = 6) deux fois, deux heures d...

Discussion

Le labyrinthe de Barnes et les expériences de la demoiselle en détresse sont des moyens peu coûteux, rapides et relativement faciles d’évaluer l’apprentissage spatial, l’activité locomotrice et comportement prosocial chez la souris. D’autres avantages incluent l’absence de facteurs d’agression manifestes, douleur ou restriction alimentaire pour l’animal. Comme la plupart des paradigmes d’apprentissage/mémoire, un inconvénient du labyrinthe Barnes est le nombre d’essais requis pour les animaux à ...

matériels

Name	Company	Catalog Number	Comments
Damsel-in-Distress
50 mL conical tube	Fisher Scientific	14-432-22	Any brand of 50 mL conical tube will work
Rubber bands	Sprano Brand	n/a	Size 62, used to keep caps held to plywood
hammer	Grainger	6R252	Any standard hammer will work
nail (size 8D)	Grainger	4NFE3	Similarly-sized nails should work just as well
opaque, topless plastic box	AcmePlastics	CUT-TO-SIZE-ACRYLIC-CAST-BLACK-SHEET-2025	Opaque plastic, cut to size (30 cm L x 19 cm W x 3-6 cm H). Step may be added to ensure no more than a 3.5 cm entrance depth for the mouse.
video camera (smartphone)	N/A	N/A	Any camera-equipped smartphone will work
bite-resistant gloves	Kent Scientific	GLVDYN02	Any brand offering appropriate protection
transparency sheet	Staples	954145	Any brand of clear plastic sheet will work, used for scoring
Barnes Maze
Petri Dishes	Corning	353025	Spray painted and used as covers for Barnes maze holes
Plywood (3/4 in.)	LP Building Products	22487	To construct Barnes maze
Spray Paint	Krylon	1274937	Used to paint petri dish caps black, white paint used to paint plywood
Cup Hooks (5/8 in.)	Ace Hardware	5360615	2 used on either side of ventral hole surfaces; Rubber band wraps around hooks to hold cap flat
Poster Board	Creatology	n/a	Used at edges of maze as extra cues
Light Bulbs	Phillips	n/a	100W light bulb, used to during the trials
Rubber bands	Sprano Brand	n/a	Size 62, used to keep caps held to plywood
Ultrasonic noisemaker	Victor mini PestChaser	M753SN	Used as aversive stimuli