Administration in vitro et in vivo d’hyperthermie par nanoparticules magnétiques à l’aide d’un système d’administration sur mesure

Résumé

Ce protocole présente les techniques et la méthodologie nécessaires à l’administration précise de l’hyperthermie des nanoparticules magnétiques à l’aide d’un système sophistiqué de livraison et de surveillance.

Résumé

L’hyperthermie a longtemps été utilisée dans le traitement du cancer. Les techniques ont varié de l’insertion intratumorale de tiges de fer chaudes, aux nanoparticules magnétiques ciblées par anticorps tumoral administrés par voie systémique, à des températures de 39 ° C (niveau de fièvre) à 1 000 ° C (électrocautérisation) et des temps de traitement de quelques secondes à quelques heures. La relation température-temps (dose thermique) dicte l’effet avec des doses thermiques élevées entraînant l’ablation des tissus et des doses thermiques plus faibles entraînant des effets sublétaux tels que l’augmentation du flux sanguin, l’accumulation de médicaments et la stimulation immunitaire. L’une des thérapies médicales actuelles les plus prometteuses est l’hyperthermie magnétique par nanoparticules (mNPH). Cette technique consiste à activer des nanoparticules magnétiques, qui peuvent être délivrées par voie systémique ou intratumorale, avec un champ magnétique alternatif non invasif et non toxique. La taille, la construction et l’association des nanoparticules magnétiques ainsi que la fréquence et l’intensité du champ magnétique sont des déterminants majeurs de l’échauffement. Nous avons développé des instruments et des techniques sophistiqués pour fournir une hyperthermie de nanoparticules magnétiques reproductibles dans des modèles animaux de grande et de petite taille et des cellules en culture. Cette approche, utilisant une surveillance continue et en temps réel de la température à plusieurs endroits, permet d’administrer des doses thermiques bien définies au tissu cible (tumeur) ou aux cellules tout en limitant le chauffage des tissus non ciblés. Le contrôle et la surveillance précis de la température, sur plusieurs sites, et l’utilisation de l’algorithme standard de l’industrie (minutes équivalentes cumulées à 43 °C / CEM43), permettent une détermination et une quantification précises de la dose thermique. Notre système, qui permet une grande variété de températures, de doses thermiques et d’effets biologiques, a été développé grâce à une combinaison d’acquisitions commerciales et de développements internes en ingénierie et en biologie. Ce système a été optimisé de manière à permettre la conversion rapide entre les techniques ex vivo, in vitro et in vivo. L’objectif de ce protocole est de démontrer comment concevoir, développer et mettre en œuvre une technique et un système efficaces pour administrer une hyperthermie reproductible et précise de thérapie par nanoparticules magnétiques (NPm).

Introduction

L’hyperthermie a toujours été utilisée dans le traitement du cancer, seule ou en combinaison avec d’autres traitements. Bien qu’il ait une longue histoire d’utilisation, la méthode la plus avantageuse pour administrer ce traitement fait encore l’objet de débats et dépend du site et de l’emplacement de la maladie. Les méthodes d’administration hyperthermique comprennent les micro-ondes, la radiofréquence, les ultrasons focalisés, le laser et les nanoparticules métalliques (comme l’or ou l’oxyde de fer)1,2,3,4. Ces méthodes d’administration peuvent conduire à une gamme de températures de traitement allant du niveau de fièvre à des centaines de degrés C. L’effet biologique de l’hyperthermie dépend principalement des températures utilisées et de la durée du traitement⁵. Pour ce manuscrit et à cette fin, nous nous concentrons sur l’hyperthermie des nanoparticules magnétiques (mNPH). Cette méthode permet des changements de température ciblés, localisés, bien surveillés et contrôlés, en utilisant des nanoparticules d’oxyde de fer non toxiques et approuvées par la FDA.

L’un des pièges des autres modalités d’hyperthermie est le manque de ciblage cellulaire précis; L’hyperthermie n’a pas un rapport thérapeutique intrinsèquement élevé, par conséquent, une thermométrie et un ciblage minutieux sont nécessaires⁶. mNPH permet l’injection systémique ou intratumorale de mNPs, la chaleur n’étant générée que là où se trouvent les mNPs, ciblant ainsi le traitement directement sur la tumeur. mNPH peut être efficace lorsque les nanoparticules magnétiques sont situées à l’intérieur ou à l’extérieur de la cellule. Pour le traitement du cancer, l’aperçu général de mNPH est que les nanoparticules magnétiques sont injectées (intratumorales ou intraveineuses), puis un champ magnétique alternatif est appliqué, provoquant le réalignement constant des pôles magnétiques des nanoparticules, conduisant à un échauffement localisé des cellules et des tissus associés aux nanoparticules ^7,8 . En ajustant le volume de nanoparticules et la fréquence/force du champ magnétique alternatif (CMA), il est possible de contrôler soigneusement la température générée dans le tissu.

Ce traitement fonctionne bien dans les tumeurs qui sont près de la surface du corps, car les tumeurs plus profondes nécessitent des CMA plus fortes, de sorte que le risque de chauffage par courants de Foucault augmente⁹. Il existe des preuves que l’hyperthermie est utilisée cliniquement en monothérapie, cependant, l’hyperthermie est souvent associée à la radiothérapie ou à la chimiothérapie, ce qui entraîne un effet anticancéreux plus ciblé^10,11,12. Les preuves cliniques de l’hyperthermie en association avec la radiothérapie sont examinées dans une publication précédente¹³. Notre laboratoire a traité avec succès une variété d’animaux, des souris aux porcs et aux cancers canins spontanés, en utilisant la méthode mNPH^12,14,15. Ce protocole est conçu pour ceux qui souhaitent étudier les effets du traitement de l’hyperthermie localisée, seul ou en combinaison avec d’autres thérapies.

L’un des facteurs les plus importants de l’hyperthermie est de pouvoir mesurer et comprendre, en temps réel, la dose thermique délivrée au tissu cible / tumoral. Une méthode standard de calcul et de comparaison de la dose consiste à démontrer les minutes équivalentes cumulées de chauffage à 43 °C; Cet algorithme permet de comparer les doses indépendamment du système d’administration, des températures maximales et minimales (dans une plage spécifique) et des paramètres de chauffage et de refroidissement ^5,16. Le calcul CEM fonctionne mieux pour des températures comprises entre 39 et 57 °C⁵. Par exemple, dans certaines des études que nous avons réalisées, nous avons choisi une dose thermique de CEM43 30 (c.-à-d. 30 min à 43 °C). Le choix de cette dose nous a permis d’examiner un effet immunogénétique sûr et efficace in vitro, à la fois seul et en combinaison avec une dose unique de rayonnement¹⁷.

Avec l’hyperthermie magnétique par nanoparticules, plusieurs facteurs doivent être pris en compte dans la construction d’un système d’administration approprié. La conception de l’instrumentation comprend des facteurs de sécurité importants, tels que l’utilisation d’un refroidisseur pour s’assurer que l’équipement de distribution de champ magnétique reste froid même lorsqu’il fonctionne à haute puissance, et des procédures à sécurité intégrée qui empêchent le système d’être allumé si tous les systèmes de température, d’évaluation de la puissance et de contrôle n’ont pas été activés. En outre, il existe des facteurs biologiques importants qui doivent être pris en compte pour les situations in vivo et in vitro. Lors de l’utilisation de cellules en culture, il est nécessaire de traiter dans un milieu de croissance et de maintenir à une température viable constante pour éviter les changements physiologiques qui pourraient affecter les résultats. Pour les types de nanoparticules individuels, il est important de connaître le débit d’absorption spécifique (DAS) lors du calcul des paramètres de chauffage basés sur les CMA. De même, il est important de connaître la concentration de mNP/Fe, dans les cellules et les tissus, qui est nécessaire pour obtenir le chauffage souhaité. Les méthodes in vivo nécessitent encore plus d’attention aux détails puisque l’animal doit être maintenu sous anesthésie pendant le traitement et que la température corporelle centrale de l’animal doit être maintenue à un niveau normal tout au long du traitement. Laisser baisser la température corporelle de l’animal, comme c’est le cas sous anesthésie, peut affecter les résultats globaux, en ce qui concerne la dose thermique du tissu traité.

Dans ce manuscrit, nous discutons des méthodes utilisées pour concevoir et construire un système polyvalent d’hyperthermie par nanoparticules magnétiques, ainsi que des facteurs d’utilisation importants qui doivent être pris en compte. Le système décrit permet l’administration robuste, cohérente, biologiquement appropriée, sûre et bien contrôlée de l’hyperthermie par nanoparticules magnétiques. Enfin, il convient de noter que les études mNPH que nous menons impliquent souvent d’autres thérapies telles que la radiothérapie, la chimiothérapie et l’immunothérapie. Pour que ces résultats soient significatifs, il est important de déterminer comment la chaleur délivrée peut affecter l’efficacité et/ou la sécurité-toxicité d’autres modalités (ou vice versa) et le bien-être de l’animal. Pour cette raison et les situations de dosimétrie et thérapeutiques mentionnées précédemment, il est essentiel de porter une attention particulière à la précision du dosage de l’hyperthermie magnétique des nanoparticules et aux mesures continues de la température du cœur et de la cible. L’objectif de ce protocole est de fournir une méthode et une description simples et cohérentes pour l’administration d’une hyperthermie de nanoparticules magnétiques sûre et efficace.

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Protocole

Le programme de soin et d’utilisation des animaux du Collège Dartmouth est accrédité par l’American Association for the Accreditation of Laboratory Animal Care (iAAALAC) et adhère à toutes les lignes directrices et réglementations de l’UDSA et du NIH (Office of Laboratory Animal Welfare). Toutes les études in vivo ont été approuvées par le Dartmouth College Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC). La procédure d’euthanasie est conforme aux directives 2020 de l’AVMA pour l’euthanasie des animaux.

1. Instrumentation/conception du système

1. Concevez une antenne AMF personnalisée (bobine) pour être une boucle fermée, en choisissant des formes pour créer le champ magnétique souhaité. Utilisez les formules d’inductance et les caractéristiques du choix du générateur de puissance pour concevoir des bobines compatibles afin de générer le champ souhaité. Utilisez différents modèles pour les expériences in vitro et in vivo.
2. Assurez-vous que l’inductance de l’antenne AMF se situe dans la plage acceptable du groupe électrogène. Ajoutez ou soustrayez des condensateurs pour faire correspondre (accorder) l’antenne au générateur de puissance.
3. Pour les expériences in vitro, concevoir une bobine hélicoïdale à 14 tours, diamètre intérieur 2 cm et longueur 14 cm, pouvant contenir des tubes de 1,5 mL, permettant le traitement simultané de plusieurs échantillons. Isolez la bobine avec un polymère vinylique et utilisez un espaceur en polystyrène pour séparer la bobine des tubes. Les détails des spécifications de conception et des considérations sont présents dans le dossier supplémentaire 1.
4. Pour les expériences in vivo, acquérir une bobine hélicoïdale du corps entier construite sur mesure auprès d’un fabricant disposant d’informations de conception exclusives. Utilisez un tube carré de 8 mm (car il crée un champ plus uniforme dans l’alésage de la bobine) et un concentrateur dans la zone de traitement ciblée. Faites le concentrateur de 5,0 cm de long, avec un total de 5 tours résultant en un diamètre intérieur de 3,6 cm, 5,2 cm de diamètre extérieur, et ayez son emplacement dans la zone de traitement ciblée. Entourez la bobine d’une coque en polycarbonate.
5. Utilisez une génératrice AMF avec puissance et fréquence réglables, évaluée à 10 kW ou plus comme source d’alimentation. L’inductance correspond à la source d’alimentation et aux antennes/bobines dans une plage de 0,62 à 1,18 μHenries (μH), ce qui permet des fréquences comprises entre 30 et 300 kHz. Refroidir le générateur en utilisant de l’eau recyclée grâce à une pompe de gavage centrifuge, pression régulée à 50 psi.
6. Refroidissez les serpentins avec un refroidisseur de capacité de refroidissement de 5,6 tonnes qui pompe un fluide caloporteur à base d’éthylène glycol à 25 % dilué avec de l’eau à travers l’antenne AMF. Réglez la température du refroidisseur de manière à ce que l’antenne ne chauffe ni ne refroidisse l’échantillon.
7. Pour le confinement des animaux, construire un support tubulaire qui peut être suspendu au centre de la bobine avec un espace d’air de 0,5 cm entre le support et la surface de la bobine. Connectez une pompe à air climatisée réglable qui fait circuler l’air à travers la coque autour de la bobine et réglez-la pour maintenir une température centrale normale chez l’animal. Connectez l’appareil d’anesthésie au porte-animal tubulaire près de la tête de l’animal pour assurer une bonne administration de l’anesthésie.
8. Pour le confinement des cellules, créez un appareil qui fait circuler l’eau d’un bain-marie à travers l’espaceur où les tubes sont placés. Réglez la température de ce bain-marie de telle sorte que les tubes soient entourés d’eau à 37 °C.
9. Utilisez des sondes à fibres optiques pour surveiller les températures dans la tumeur, le noyau de l’animal et l’environnement animal ou pour des études in vitro, la surveillance de la température de la pastille cellulaire et de l’eau entourant les tubes.
10. Utilisez des nanoparticules magnétiques d’oxyde de fer d’une taille de 100 nm pour toutes les expériences.
    NOTE: La concentration et le débit d’absorption spécifique (DAS) sont deux caractéristiques qui doivent être prises en compte lors du choix des nanoparticules, car elles affectent directement la dose de chauffage et thermique possible¹⁸.

2. Hyperthermie in vitro

1. Culture de cellules de mélanome murin B16F10 dans un milieu RPMI avec 10% FBS et 1% Pen/streptocoque. Plaque 150 000 cellules/puits dans des plaques à 6 puits, avec 2 mL de milieu complet.
2. Déterminer le traitement approprié pour chaque puits, c.-à-d. cellules sans NP et sans CMA, cellules sans NPm et sans CMA, cellules sans NPm et CMA, cellules sans NPm et CMA.
   REMARQUE: De plus, assurez-vous qu’il existe des contrôles appropriés si vous combinez l’hyperthermie avec un autre traitement. L’AMF est réalisée dans un laboratoire de banc de recherche standard équipé des capacités d’alimentation et de refroidissement nécessaires.
3. 24 h après le placage, ajouter les NP aux puits appropriés, comme déterminé à l’étape précédente. Ajouter des mNPs à une concentration de 3 mg de fer/mL. S’assurer que les mNP sont répartis dans tout le puits, soit en créant une solution stock/mNP (retrait des anciens milieux, ajout de cette solution), soit en ajoutant les mNP directement et en faisant doucement tourbillonner les plaques pour une distribution homogène.
4. Commencer le traitement, 48 h après l’ajout de mNPs, lorsque les puits sont ~80% confluents, en retirant le média et en lavant les puits avec du fluide frais. Retirez le support.
5. Ajouter 0,5 mL de trypsine à chaque puits traité et agiter doucement. Utilisez un microscope pour vérifier que les cellules sont détachées.
6. Ajouter 1 mL de média à chaque puits pour recueillir les cellules dans des tubes de 1,5 mL. Recueillir toutes les cellules du puits (~1 x 10⁶ cellules). Utilisez un tube séparé clairement étiqueté pour chaque puits.
7. Faire tourner les tubes à 60 x g pendant 2-3 min pour permettre aux cellules de s’enrober. Conservez la pastille dans le média.
8. Placez les tubes dans l’intercalaire remplis d’eau à l’intérieur de la bobine. Régler la température du bain-marie de telle sorte que le média et la pastille de la cellule soient maintenus à 37 °C. Surveillez la température dans le tube et le bain-marie à l’aide de sondes de température à fibre optique séparées.
9. Allumez le refroidisseur, vérifiez que le liquide de refroidissement circule dans le serpentin. Allumez la source d’alimentation et réglez le pourcentage de maximum au champ souhaité. Faire fonctionner la bobine solénoïde à 14 tours, alimentée par un générateur de 10 kW, à 165 kHz et 23,87 kA/m (300 Oe).
10. Placez une sonde de température à fibre optique séparée dans l’un des tubes. Traiter les cellules jusqu’à la dose thermique du protocole préalablement déterminée. Un exemple est 30 min à 43 °C (CEM43 sur 30).
11. Resuspendre les cellules dans le milieu qui se trouve dans leurs tubes et re-plaquer dans de nouvelles plaques de 6 puits. Étiquetez clairement les nouvelles plaques. L’objectif est de re-plaquer toutes les cellules collectées (~1 x 10⁶ cellules).
    REMARQUE : De nouvelles plaques à 6 puits doivent être utilisées pour s’assurer que les cellules cultivées reçoivent un traitement. Si les anciennes plaques sont utilisées, il pourrait encore y avoir des cellules restées sur les plaques qui n’ont pas été trypsinisées avec succès.
12. Si nécessaire, pour la procédure expérimentale suivante, lyser les cellules pour l’analyse de l’expression de l’ARN ou des protéines.

3. Hyperthermie in vivo

1. Culture cellulaire et inoculation
   1. Culture de cellules de mélanome murin B16F10 dans un milieu RPMI avec 10% FBS et 1% Pen/streptocoque. Utilisez des assiettes/plats qui fourniront suffisamment de cellules pour inoculer le nombre désiré d’animaux. Par exemple, des boîtes de 10, 100 mm, plaquées à 100 000 cellules seront confluentes avec suffisamment de cellules pour des injections de 20 souris en 48 heures.
   2. Trypsiniser les cellules et recueillir en utilisant des médias RPMI purs (pas de FBS ou stylo / streptocoque).
   3. Comptez les cellules et créez une solution pour la concentration souhaitée de cellules, en fonction du volume d’inoculation et du nombre de souris.
   4. Anesthésier les souris C57Bl/6 femelles âgées de 6 semaines à l’aide d’isoflurane vaporisé et d’oxygène. Placez les animaux dans une boîte en plexiglas contenant 5 % d’isoflurane et 95 % d’oxygène jusqu’à incitation. Une fois induit, enlever l’animal et utiliser un cône facial contenant 2 % d’isoflurane pour compléter les étapes 3.1.5-3.1.7 et 3.3.3-3.3.6.
      REMARQUE: Pour l’anesthésie pendant le traitement, utilisez un confinement d’anesthésie intégré. Suivez les protocoles institutionnels standard pour l’anesthésie de la souris. Avant l’expérimentation animale, assurez-vous de l’approbation appropriée de l’IACUC. Après l’anesthésie, remettez l’animal en cage et surveillez la récupération pour éviter toute complication.
   5. Vérifiez l’absence de réponse aux réflexes de redressement.
   6. Rasez le flanc droit à l’aide d’un rasoir électrique.
   7. Nettoyez la zone d’injection avec une lingette imbibée d’alcool. Injecter 1-2 x 10⁶ cellules, à l’aide d’une seringue en verre de 100 μL avec une aiguille de 28 G, dispersées dans 50 μL de milieu par voie intradermique sur le flanc droit rasé de l’anesthésié.
2. Croissance tumorale/injection de nanoparticules
   1. Mesurez les tumeurs en 3 dimensions à l’aide d’étriers (longueur, largeur et profondeur) et calculez les volumes par (longueur x largeur x profondeur x π) / 6.
   2. Lorsque les volumes tumoraux atteignent 120 mm 3 (+/- 20 mm³), placez les animaux à l’étude. Concevoir l’étude en veillant à ce qu’il y ait des groupes témoins et de traitement appropriés, y compris des cohortes de thérapie combinée (c.-à-d. témoin, mNPH, radiothérapie et combinaison).
   3. Anesthésier les souris qui recevront des NP de la manière décrite à la section 3.1.4.
   4. Nettoyez la zone avec une lingette imbibée d’alcool. Injecter des mNPs dans la tumeur 3 h avant le traitement par AMF. Injecter un volume tel que la dose soit de 7,5 mg de fer / cm³ de tumeur.
      REMARQUE : Des données non publiées du laboratoire suggèrent que l’absorption maximale du NPm se produit à 3-6 heures.
3. Traitement AMF
   1. Anesthésiez la souris et placez-la sur un coussin chauffant pour maintenir la température centrale.
   2. Vérifiez l’absence de réponse aux réflexes de redressement. Retirez l’étiquette d’oreille ou tout autre objet métallique sur la souris.
   3. Placez doucement une sonde de température à fibre optique lubrifiée dans le rectum de la souris.
   4. Placez un cathéter dans la tumeur, en retirant l’aiguille. Coupez le cathéter de manière à ce qu’il ne dépasse pas trop de la tumeur.
      REMARQUE: Les cathéters de température à fibre optique sont placés et retirés pendant que les souris sont sous anesthésie générale, c’est-à-dire que les cathéters ne sont en place que pendant la procédure de chauffage de la tumeur. Les souris reçoivent une dose sous-cutanée unique d’un analgésique AINS, le kétoprofène (5 mg / kg), au moment de la procédure. Nous n’avons pas observé d’inconfort ou de morbidité à court ou à long terme associés à la mise en place des cathéters.
   5. Insérez une sonde de température à fibre optique à 3 capteurs dans le cathéter. Le cathéter protège les capteurs de sonde de température à fibre optique.
   6. Collez la sonde rectale et intratumorale à la queue de l’animal pour vous assurer qu’elle reste en place.
   7. Placez la souris dans un tube de 50 mL, dirigez-vous vers le bas. Le tube doit avoir un trou près de la tête où l’anesthésie sera connectée et administrée.
   8. Placez le tube dans la bobine installée et reconnectez l’anesthésie.
   9. Placez une sonde de température à fibre optique dans le tube pour mesurer la température ambiante.
   10. Allumez le refroidisseur et assurez-vous que le liquide de refroidissement circule.
   11. Vérifiez et assurez-vous que le logiciel de l’ordinateur affiche les différentes températures et commencez l’enregistrement pour permettre l’affichage d’un calcul CEM43 en temps réel. La CEM43 requise est la dose précédemment déterminée.
       REMARQUE: Avant d’allumer l’aimant, assurez-vous qu’aucun objet métallique n’est attaché à l’animal, car il chauffera rapidement. De plus, assurez-vous que tout le monde dans la pièce n’a pas de stimulateur cardiaque et qu’il est sécuritaire pour eux d’être là.
   12. Allumez l’aimant à un faible pourcentage de puissance.
   13. Assurez-vous que les sondes de température à fibre optique enregistrent les changements de température. Les températures augmenteront une fois que le CMA sera activé à mesure que le champ augmentera. S’assurer que la température à cœur de l’animal reste à 38 °C. Réglez la température à cœur à l’aide de la chemise d’air conditionnée.
   14. Ajustez la force du champ magnétique en changeant l’alimentation du générateur, à l’aide du cadran de contrôle intégré, qui à son tour contrôle le niveau de température dans la tumeur.
   15. Couper l’AMF une fois que la dose souhaitée, telle que précédemment déterminée par l’utilisateur (par exemple CEM43 40), est atteinte dans la tumeur.
   16. Une fois l’AMF arrêté, retirez le tube de la bobine.
   17. Retirez la souris du tube, en extrayant les différentes sondes et cathéter. Si nécessaire, marquez l’animal avec une nouvelle étiquette d’oreille en métal.
   18. Une fois les traitements terminés, arrêtez le refroidisseur.
   19. Récupérez les animaux de l’anesthésie en évitant les complications. Surveillez leur comportement pour assurer un retour à la normale.

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Résultats

Études in vitro
Les cellules n’atteindront et ne maintiendront la température et la dose thermique souhaitées que si la quantité et la concentration des nanoparticules magnétiques/fer et de l’AMF sont correctement appariées. Lors de l’utilisation de nanoparticules magnétiques pour chauffer des cellules in vitro (et in vivo), il convient de noter que pour atteindre l’hyperthermie dans des cellules avec des nanoparticules magnétiques internalisées, un niveau spécifique de mNP / Fe intr...

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Discussion

La conception et la mise en œuvre de ce système permettent de mener des expériences précises et reproductibles in vitro et in vivo d’hyperthermie magnétique par nanoparticules. Il est essentiel que le système soit conçu de manière à ce que la fréquence et l’intensité du champ AMF correspondent adéquatement au type de nanoparticules magnétiques, à la concentration, ainsi qu’à l’emplacement et à la température des tissus souhaités. De plus, la surveillance précise de la température en temps rée...

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matériels

Name	Company	Catalog Number	Comments
.25% Trypsin	Corning	45000-664	available from many companies
1.5 mL tubes	Eppendorf	Eppendorf 22363204	available from many companies
B16F10 murine melanoma cells	American Type Culture Collection	CRL-6475
C57/Bl6 mice	Charles river	027C57BL/6	6-week-old female mice
Chiller	Thermal Care	NQ 5 series	chiller that cools the coil
Coolant fluid	Dow Chemical Company	Dowtherm SR-1	antenna cooling fluid
Fetal Bovine serum	Hyclone	SH30071	available from many companies
fiber optic probes, software and chassis	FISO		FISO evolution software used to read the temperatures
IR camera	Flir		infrared camera to monitor unintentional heating
iron oxide nanoparticles	micromod Partikeltechnologie GmbH	Bionized NanoFerrite	dextran coated iron oxide nanoparticles
mouse coil, solenoid	Fluxtrol	custom built
penicillin/streptomycin	Corning	45000-652	available from many companies
RF generator	Huttinger	TIG 10/300	power source
RPMI media	Corning	45000-396	available from many companies