Modélisation de la sclérose en plaques chez les deux sexes : encéphalomyélite auto-immune expérimentale induite par MOG35-55

Résumé

L’encéphalomyélite auto-immune expérimentale est l’un des modèles murins les plus utilisés de la sclérose en plaques. Dans le protocole actuel, les souris C57BL/6J des deux sexes sont immunisées avec le peptide glycoprotéique oligodendrocytaire de myéline, ce qui entraîne principalement une parésie ascendante de la queue et des membres. Nous discutons ici du protocole d’induction et d’évaluation de l’EAE.

Résumé

La sclérose en plaques (SEP) est une maladie inflammatoire auto-immune chronique qui affecte le système nerveux central (SNC). Elle se caractérise par une prévalence différente chez les sexes, touchant plus de femmes que d’hommes, et des résultats différents, montrant des formes plus agressives chez les hommes que chez les femmes. De plus, la SEP est très hétérogène en termes d’aspects cliniques, de caractéristiques radiologiques et pathologiques. Ainsi, il est nécessaire de tirer parti de modèles animaux expérimentaux qui permettent d’étudier autant d’aspects de la pathologie que possible. L’encéphalomyélite auto-immune expérimentale (EAE) représente l’un des modèles les plus utilisés de la SEP chez la souris, modélisant différentes caractéristiques de la maladie, de l’activation du système immunitaire aux lésions du SNC. Nous décrivons ici un protocole pour l’induction de l’EAE chez les souris mâles et femelles C57BL/6J en utilisant l’immunisation par le peptide glycoprotéique de l’oligodendrocyte de myéline 35-55 (MOG_35-55), ce qui conduit au développement d’une forme chronique de la maladie. Nous rapportons également l’évaluation du score clinique quotidien et des performances motrices de ces souris pendant 28 jours après l’immunisation (28 dpi). Enfin, nous illustrons quelques analyses histologiques de base au niveau du SNC, en nous concentrant sur la moelle épinière en tant que site principal des lésions induites par la maladie.

Introduction

La sclérose en plaques (SEP) est une maladie inflammatoire auto-immune chronique qui affecte le système nerveux central (SNC). Il montre la présence d’une infiltration périvasculaire de cellules inflammatoires, d’une démyélinisation, d’une perte axonale et d’une gliose¹. Son étiologie reste inconnue, et ses aspects cliniques, radiographiques et pathologiques suggèrent une remarquable hétérogénéité de la maladie².

En raison de son étiologie et de sa complexité inconnues, aucun modèle animal ne récapitule actuellement toutes les caractéristiques cliniques et radiologiques présentées dans la SEP<....

Protocole

Les soins et la manipulation des animaux dans le cadre du présent travail ont été effectués conformément à la directive du Conseil de l’Union européenne du 22^septembre 2010 (2010/63/UE) ; toutes les procédures rapportées dans la présente étude ont été approuvées par le ministère italien de la Santé (407/2018-PR) et par le Comité d’éthique de l’Université de Turin (projet n° 360384). Nous suggérons de se conformer au plan expérimental aux lignes directrices ARRIVE publiées à l’origine par Kilkenny et al. en 2010²⁰. Avant de commencer, assurez-vous que le matériel nécessaire est disponible (voir le tableau des matériaux

Discussion

Le protocole EAE induit par MOG_35-55 que nous avons décrit a conduit au développement d’une forme chronique de SEP chez les souris C57BL/6J ^7,8,13. Dans ces résultats représentatifs, nous avons rapporté que les animaux des deux sexes qui ont subi la procédure d’immunisation ont développé une forme chronique de la maladie (c’est-à-dire qu’ils ne se rétablissent pas complètement après l’apparition .......

matériels

Name	Company	Catalog Number	Comments
18 G x 1 ½“ 1.2 x 40 mm needle for the glass syringe	Terumo	TER-HYP-18G-112-PIN
Digital camera connected to the optical microscope	NIKON DS-U1 digital camera
Electronic precision balance	Merck	Mod. Kern-440-47N, resolution 0.1 g
Eosin Y	Sigma-Aldrich	HT110216
Glass syringe pipet “ultra asept” 10 ml	Sacco System	L003465
Glassware (i.e., becker to prepare the emulsion)	VWR	213-1170, 213-1172
Hematoxylin (Mayer’s)	Sigma-Aldrich	MHS32	Filter before using it.
Image analysis Software	Fiji
Incomplete Freund’s adjuvant (IFA)	Sigma-Aldrich	F5506	Store at +4 °C.
Isoflurane	Wellona Pharma		This drug is used as inhalational anaesthetic.
Male and female C57BL/6J mice	Jackson Laboratory, Envigo		Age 8-10 weeks, optimal body weight of ~20 g.
Microtome	Leica HistoCore BIOCUT R
Mounting Medium	Merck	107961
Mouse Rotarod	Ugo Basile	#47600
Mycobacterium tuberculosis (MT), strain H37Ra	Difco Laboratories Inc.	231141	Store at +4 °C.
Myelin oligodendrocyte glycoprotein peptide 35-55 (MOG35-55)	Espikem	EPK1	Store at -80 °C diluted (2 mg/mL) in physiological solution; prepare it on the day of the immunization to avoid, as much as possible, alterations or contaminations.
Optical microscope	NIKON eclipse 90i
Paraformaldehyde (PFA)	Sigma-Aldrich	158127	Store at +4 °C once diluted (4%) in phosphate buffer.
Pertussis toxin (PT)	Duotech	PT.181	Store at -80°C diluted (concentration 5 µg/mL) in physiological solution
Physiological solution (sodium chloride 0.9% solution)	B. Eurospital	A 032182038	Store at +4 °C once opened.
Saline phosphate buffer (PBS)	Thermo Scientific	J61196.AP
Software for image acquisition	NIS-Element AR 2.10
Syringes U-100 0.5 mL with 30 G x 5/16” (0.30 x 8 mm) in fixed needle	Nipro	SYMS-0.5U100-3008B-EC
Syringes U-100 1 mL with 26G x ½” (0.45 x 12.7 mm) in needle	PIC	20,71,26,03,00,354
Vet ointment for eyes	Lacrilube, Lacrigel Europhta
Xylazine	Rompun		This mixture of drug is used as injectable anaesthetic and sedative.
Zolazepam and Tiletamine	Zoletil  100		This drug is used as injectable anaesthetic, sedative, muscle relaxer, and analgesic