Lésion par congélation dans le muscle masséter de souris pour établir un modèle de fibrose musculaire orofaciale

Résumé

L’objectif de ce protocole est d’établir un modèle de fibrose musculaire orofaciale. La comparaison de l’histologie entre le masséter de souris et le muscle tibial antérieur après une blessure par congélation a confirmé la fibrose du muscle masséter. Ce modèle facilitera l’étude plus approfondie du mécanisme sous-jacent à la fibrose musculaire orofaciale.

Résumé

Le muscle orofacial constitue un sous-ensemble du tissu musculaire squelettique, avec une trajectoire évolutive distincte et une origine de développement. Contrairement aux muscles des membres dérivés du somite, les muscles orofaciaux proviennent des arcs branchiaux, avec des contributions exclusives de la crête neurale crânienne. Une étude récente a révélé que la régénération est également différente dans le groupe des muscles oro-faciaux. Cependant, le mécanisme réglementaire sous-jacent reste à découvrir. Les modèles actuels de régénération des muscles squelettiques se concentrent principalement sur les muscles des membres et du tronc. Dans ce protocole, la glace sèche a été utilisée pour induire des lésions de gel dans le muscle masséter de souris et le muscle tibial antérieur afin de créer un modèle de fibrose musculaire orofaciale. La dynamique temporelle des cellules satellites musculaires et des progéniteurs fibro-adipogènes était différente entre les deux muscles, entraînant une altération de la régénération des myofibres et un dépôt excessif de matrice extracellulaire. Avec l’aide de ce modèle, une étude plus approfondie de la régénération musculaire dans la zone orofaciale pourrait être menée afin de développer des approches thérapeutiques pour les patients atteints de maladies orofaciales.

Introduction

Les muscles orofaciaux sont essentiels dans les activités physiologiques quotidiennes telles que la mastication, la parole, la respiration et l’expression faciale¹. Dans les malformations orofaciales congénitales, cependant, ces muscles présentent des altérations atrophiques et fibrotiques, entraînant une altération de la santé corporelle et de la cognition sociale². La chirurgie reconstructive faciale reste le traitement de première intention, mais jusqu’à 30 à 70 % des patients postopératoires souffrent encore de perte musculaire et de dysfonctionnement ^{musculaire3,4....}

Protocole

Toutes les procédures animales de cette étude ont été examinées et approuvées par le comité d’éthique de l’École de stomatologie de l’Ouest de la Chine de l’Université du Sichuan (WCHSIRB-D-2020-114). Les souris C57BL/6 mâles (âgées de 5 semaines) ont été élevées dans un établissement à humidité contrôlée (53 ± 2 %) et à température contrôlée (23 ± 2 °C) et ont suivi un cycle lumière/obscurité de 12 heures. Voir le Tableau des matériaux pour plus de détails sur tous les matériaux, réactifs et instruments utilisés dans ce protocole.

1. Dommages causés par le gel

1. Anesthésie : Sédater les souris avec....

Discussion

Il existe une variété de modèles de lésions pour l’étude de la régénération des muscles squelettiques, y compris l’utilisation de stimuli physiques, chimiques et chirurgicaux 10,11,12,13,14,15,16. La cardiotoxine et le chlorure de baryum sont les deux produits chimiques les plus .......

matériels

Name	Company	Catalog Number	Comments
1 mL syringe	Shifeng Medical Apparatus and Instrument (Chengdu, Sichuan, China)	1-ml syringe	/
Acetone	Chron Chemicals	Aceton	/
Adhesion microscope slides	Citotest Scientific	188105	/
Animal depilatory	Phygene Scientific	PH1877	/
BSA (bovine serum albumin)	Solarbio Life Sciences	A8010	/
DAPI	Solarbio Life Sciences	C0065	/
Donkey anti-goat Alexa Fluor 488	Abcam	ab150129	1:200
donkey serum	Solarbio Life Sciences	SL050	/
Dry Ice	Sinrro Technology (Chengdu, Sichuan, China)	rice-shaped dry ice	/
IFKine Red Donkey anti-rabbit	Abbkine Scientific Company	A24421	1:200
Insulation barrels (big)	Thermos	D600	/
Insulation barrels (small)	Polar Ware	250B	/
Isoflurane	RWD Life Technology Company (Shenzhen, Guangdong, China)	R510-22	/
Isopentane	MACKLIN	M813375	/
Laminin	Sigma-Aldrich	L9393	1:1000
Liquid nitrogen	Sinrro Technology (Chengdu, Sichuan, China)	/	/
M.O.M kit	Vector Laboratories	BMK-2202
Mice	Dashuo Biological Technology Company(Chengdu, Sichuan, China)	5 weeks old	/
mounting medium	Solarbio Life Sciences	S2100	/
Nertral balsam	Solarbio Life Sciences	G8590	/
Pax7	Developmental Studies Hybridoma Bank	Pax7	1:5
Pdgfra	R&D systems	AF1062	1:40
Sirus Red Staining Kit	Solarbio Life Sciences	G1472	/
Surgical instruments (forceps, scissors, needle holder, scalpel, and suture)	Zhuoyue Medical Instrument (Suqian, Jiangsu, China)	/	/
Tissue-tek OCT	Sakura	4583	/
Triton	Shanghai Scigrace Biotech	ABIO-Biofroxx-0006A	/
Zoletil	Virbac	Zoletil 50	/