Régulation de la croissance des cellules de Schwann par un champ électrique pulsé nanoseconde pour la régénération des nerfs périphériques in vitro

Résumé

Ici, nous présentons un protocole d’application d’un champ électrique à impulsions nanosecondes (nsPEF) pour stimuler les cellules de Schwann in vitro. La capacité de synthèse et de sécrétion des facteurs pertinents et les changements de comportement cellulaire ont validé la stimulation réussie à l’aide de nsPEF. L’étude donne une vision positive de la méthode de régénération des nerfs périphériques.

Résumé

Les cellules de Schwann (SC) sont des cellules myélinisantes du système nerveux périphérique, jouant un rôle crucial dans la régénération des nerfs périphériques. Le champ électrique pulsé nanoseconde (nsPEF) est une méthode émergente applicable à la stimulation électrique nerveuse qui s’est avérée efficace pour stimuler la prolifération cellulaire et d’autres processus biologiques. Dans le but d’évaluer si les CS subissent des changements significatifs sous nsPEF et d’aider à explorer le potentiel de nouvelles méthodes de régénération des nerfs périphériques, les cellules RSC96 cultivées ont été soumises à une stimulation nsPEF à 5 kV et 10 kV, suivie d’une culture continue pendant 3 à 4 jours. Par la suite, certains facteurs pertinents exprimés par les CS ont été évalués pour démontrer le succès de la stimulation, notamment la protéine marqueur spécifique, le facteur neurotrophique, le facteur de transcription et le régulateur de myélinisation. Les résultats représentatifs ont montré que nsPEF améliorait significativement la prolifération et la migration des CS et la capacité à synthétiser les facteurs pertinents qui contribuent positivement à la régénération des nerfs périphériques. Simultanément, une expression plus faible de GFAP indiquait le pronostic bénin des lésions nerveuses périphériques. Tous ces résultats montrent que nsPEF a un grand potentiel en tant que méthode de traitement efficace des lésions nerveuses périphériques en stimulant les CS.

Introduction

Chaque année, des millions de personnes sont touchées par des lésions nerveuses impliquant à la fois le système nerveux périphérique (SNP) et le système nerveux central (SNC)¹. Des études ont démontré que la capacité de réparation axonale du SNC est assez limitée après des lésions nerveuses, tandis que le SNP présente une capacité accrue en raison de la plasticité significative des SC². Néanmoins, la régénération complète après des lésions des nerfs périphériques reste ardue et continue de poser un défi important à la santé humaine ^3,4. De nos jours, les autogref....

Protocole

1. Décongélation de cellules RSC96 cryoconservées

1. Décongelez le flacon cryogénique contenant 1 mL de suspension cellulaire en l’agitant rapidement dans un bain-marie à 37 °C, puis ajoutez-le dans un tube à centrifuger contenant 4 à 6 mL de milieu de culture complet et mélangez bien.
2. Centrifuger à 1000 x g pendant 3 à 5 min, jeter le surnageant et remettre les cellules en suspension dans 3 mL de milieu de culture complet.
3. Ajouter la suspension cellulaire dans une fiole (ou une boîte) contenant de 6 à 8 mL de milieu de culture complet et incuber à 37 °C pendant la nuit.
4. Le lendemain, observez la croissanc....

Discussion

Ces dernières années, l’application de nsPEF a connu une croissance stimulée, comme indiqué. nsPEF a un effet très ciblé uniquement sur la zone souhaitée, fournissant suffisamment d’énergie pour traiter sans causer de dommages thermiques supplémentaires, ce qui le rend plus sûr pour le corps humain²⁸. Ces caractéristiques lui confèrent des perspectives translationnelles prometteuses dans le traitement des tumeurs et la régénération nerveuse. Cependant, certaines études ont prop.......

matériels

Name	Company	Catalog Number	Comments
Antifade mounting medium	Wuhan Xavier Biotechnology Co., LTD	G1401
Anti-GFAP Mouse mAb	Wuhan Xavier Biotechnology Co., LTD	GB12100-100
Anti-Neurofilament heavy polypeptide Mouse mAb	Wuhan Xavier Biotechnology Co., LTD	GB12144-100
Anti-S100 beta Mouse mAb	Wuhan Xavier Biotechnology Co., LTD	GB14146-100
BSA	Wuhan Xavier Biotechnology Co., LTD	GC305010
Coverslip	Jiangsu Shitai experimental equipment Co., LTD	10212432C
CY3-labeled goat anti-mouse IgG	Wuhan Xavier Biotechnology Co., LTD	GB21302
DAPI Staining Reagent	Wuhan Xavier Biotechnology Co., LTD	G1012
Decolorizing shaker	Wuhan Xavier Biotechnology Co., LTD	DS-2S100
High Voltage Power Supply for nsPEF	Matsusada Precision Inc.	AU-60P1.6-L
Histochemical pen	Wuhan Xavier Biotechnology Co., LTD	G6100
Membrane breaking liquid	Wuhan Xavier Biotechnology Co., LTD	G1204
Microscope slide	Wuhan Xavier Biotechnology Co., LTD	G6012
Palm centrifuge	Wuhan Xavier Biotechnology Co., LTD	MS6000
PBS powdered	Wuhan Xavier Biotechnology Co., LTD	G0002
Pipette	Wuhan Xavier Biotechnology Co., LTD
Positive fluorescence microscope	Nikon, Japan	NIKON ECLIPSE C1
Rabbit Anti-SOX10/AF488 Conjugated antibody	Beijing Bioss Biotechnology Co., LTD	BS-20563R-AF488
RSC96 Schwann cells	Wuhan Xavier Biotechnology Co., LTD	STCC30007G-1
scanister	3DHISTECH	Pannoramic MIDI
Special cable for nsPEF	Times Microwave Systems	M17/78-RG217
Turbine mixer	Wuhan Xavier Biotechnology Co., LTD	MV-100