Surveillance de la glycémie chez la progéniture de souris après une injection intracytoplasmique de spermatozoïdes

Résumé

Ici, nous présentons un protocole pour établir un modèle murin d’injection intracytoplasmique de spermatozoïdes (ICSI)-transfert d’embryon (ET), nous permettant d’observer les changements liés à l’âge dans le métabolisme du glucose qui peuvent être attribués à l’ICSI, donnant ainsi un aperçu de ses impacts potentiels à long terme sur le développement humain.

Résumé

La durée de vie humaine est considérablement longue, tandis que les modèles murins peuvent simuler toute la durée de vie humaine sur une période relativement courte, avec une année de vie de souris à peu près équivalente à 40 années humaines. L’injection intracytoplasmique de spermatozoïdes (ICSI) est une technologie de procréation assistée couramment utilisée dans la pratique clinique. Cependant, étant donné son émergence relativement récente il y a environ 30 ans, les effets à long terme de cette technique sur le développement humain restent incertains. Dans cette étude, nous avons établi la méthode ICSI combinée à la méthode de transfert d’embryons (TE) à l’aide d’un modèle murin. Les résultats ont démontré que les spermatozoïdes de souris normaux, après avoir subi une culture in vitro et une ICSI ultérieure, présentaient un taux de fécondation de 89,57 % et un taux de 87,38 % sur deux cellules. Après l’ET, le taux de natalité de la progéniture était d’environ 42,50 %. De plus, à mesure que les souris vieillissaient, des fluctuations du métabolisme du glucose ont été observées, ce qui peut être associé à l’application de la technique ICSI. Ces résultats signifient que la technique ICSI-ET de souris fournit une plate-forme précieuse pour évaluer l’impact des anomalies des spermatozoïdes sur le développement de l’embryon et leurs effets à long terme sur la santé de la progéniture, en particulier en ce qui concerne le métabolisme du glucose. Cette étude fournit des informations importantes pour la poursuite des recherches sur les effets potentiels de la technique ICSI sur le développement humain, en soulignant la nécessité d’une enquête approfondie sur les implications à long terme de cette technologie.

Introduction

Les questions de fertilité sont devenues un sujet de préoccupation majeur pour la médecine et la sociologie, en particulier dans la société moderne où la baisse des taux de fécondité et la gravité croissante de la prévalence et de la gravité de l’infertilité ont pris de l’importance. La technologie de procréation assistée (ART) offre un large éventail de possibilités pour relever ces défis, l’injection intracytoplasmique de spermatozoïdes (ICSI) étant couramment utilisée comme intervention thérapeutique.

Depuis que Palerme a signalé la première grossesse réussie obtenue par injection i....

Protocole

Le protocole de l’ICSI-ET décrit ci-dessous suit les directives et a été approuvé par l’examen éthique des animaux de l’Institut de recherche de Shanghai sur la planification familiale. Procédures de sécurité : Portez toujours un équipement de protection individuelle (EPI) approprié lorsque vous manipulez des produits chimiques ou des matières biologiques. Utilisation des hottes : Effectuer toutes les procédures impliquant la génération de produits chimiques volatils ou d’aérosols dans une hotte ou une enceinte de biosécurité certifiée. Utilisez des souris femelles (souche B6D2F1 âgée de 6 à 8 semaines) pour la procédure de superovula....

Discussion

Cette étude a intégré des techniques d’injection intracytoplasmique de spermatozoïdes (ICSI) et de transfert d’embryons (TE) de souris pour récapituler de manière exhaustive la technologie de procréation assistée humaine (ART) et examiner l’impact de l’ICSI en conjonction avec l’ET sur le développement de la progéniture. L’application de la technique ICSI avec des spermatozoïdes de souris normaux a donné un taux élevé de fécondation (86,76 %) et de taux à 2 ce.......

matériels

Name	Company	Catalog Number	Comments
1.25% avertin (2,2,2-tribromoethanol)	Nanjing Aibei	M2960	for anesthetization
Bacteriological Petri Dishes 35 x 10 mm style w/tight lid, crystal-grade virgin polystyrene, sterile	BD	353001
Bacteriological Petri Dishes 50 x 9 mm style w/tight lid, crystal-grade virgin polystyrene, sterile	BD	351006
Biosafety Cabinet	ESCO	class BSC	Aseptic operations, making culture dishes, aliquoting reagents, etc.
CO2 Incubator	Thermo	8000DH	Embryo culture
Dissection Microscope	Olympus	SZX16	Use in mouse embryo transfer
Fluorinert Fc-770	SIGMA	F3556	Fluorinert FC-770 is a thermally stable fully fluorinated liquid with high dielectric strength and resistivity, used as operating fluid
handheld glucometer	Roche	AccuChek performa	Blood glucose measurement
HTF	Merck	MR-070-D	The EmbryoMax Human Tubal Fluid (HTF) (1x), liquid designed for use with Mouse IVF is available in a 50 mL format and has been optimized and validated for Embryo Culture.
Hydraulic Microinjector	Eppendorf	CellTram 4r Oil, 5196000030	For sperm injection
Inverted Microscope	Nikon	TI2-U	Micromanipulation observation host
KSOM	Merck	MR-020P-D	(1x), Powder, w/o Phenol Red, 5 x 10 mL
M2	Merck	MR-015-D	EmbryoMax M2 Medium (1x), Liquid, with Phenol Red
Micromanipulator	NARISHIGE	NTX-N4	Micromanipulation arm
mineral oil	SIGMA	M8410	Mineral oil is suitable for use as a cover layer to control evaporation and cross-contamination in various molecular biology applications.
Needle Cutter	Nanjing Aibei	Sutter MF-800	Use for fabricating micromanipulation needles
Needle Puller	Nanjing Aibei	Sutter model p-100	Use for making micromanipulation needles
Piezo Drill Trip Mouce ICSI	Eppendorf	5195000.087	Application of ICSI injection needle.
Piezoelectric Micromanipulator (Membrane Breaker)	Eppendorf	Eppendorf PiezoXpert	Use of micro-pulses to break the zona pellucida and oolemma of the oocyte
Pneumatic Microinjector	Eppendorf	CellTram 4r Air, 5196000013	For fixing the oocyte
Ready-to-use Human Chorionic Gonadotropin (Hcg)	Nanjing Aibei	M2520	Sterilization reagent, intraperitoneal injection. 50 IU/mL
Ready-to-use Pregnant Mare's Serum Gonadotropin (PMSG)	Nanjing Aibei	M2620	Sterilization reagent, intraperitoneal injection. 50 IU/mL
Stereomicroscope	Olympus	SZX7	Oocyte retrieval and observation of embryo development