Une technique d’injection intrapéritonéale chez le poisson-zèbre adulte qui minimise les dommages corporels et la mortalité associée

Résumé

Une nouvelle méthode d’injection intrapéritonéale (IP) chez le poisson-zèbre adulte est décrite. Lors de la manipulation de composés toxiques tels que la doxorubicine, cette procédure est plus efficace que les deux méthodes de propriété intellectuelle précédemment mentionnées. La technique est conçue pour être facilement adoptée par les chercheurs ayant une expérience limitée du modèle du poisson zèbre.

Résumé

Le poisson-zèbre adulte (Danio rerio), qui est génétiquement accessible, est utilisé comme un modèle de vertébré précieux pour étudier des troubles humains tels que la cardiomyopathie. L’injection intrapéritonéale (IP) est une méthode importante qui délivre des composés dans le corps pour tester des effets thérapeutiques ou générer des modèles de maladies tels que la cardiomyopathie induite par la doxorubicine (CIVD). Actuellement, il existe deux méthodes d’injection IP. Les deux méthodes ont des limites lors de la manipulation de composés toxiques tels que la doxorubicine, qui entraînent des effets secondaires se manifestant par de graves dommages à la forme du corps et la mort des poissons. Bien que ces lacunes puissent être surmontées par une formation approfondie des enquêteurs, une nouvelle méthode d’injection de PI qui a un minimum d’effets secondaires est souhaitable. Ici, une méthode d’injection IP unique capable de gérer des composés toxiques est rapportée. Une réduction constante de la fonction cardiaque peut entraîner sans entraîner de mort significative des poissons. La technique peut être facilement maîtrisée par des chercheurs qui ont une expérience minimale avec les poissons-zèbres adultes.

Introduction

Le poisson-zèbre (Danio rerio) a attiré l’attention en tant que modèle expérimental pour l’étude des maladies humaines parce que cet animal présente une homologie élevée de gènes et d’organes avec les humains, une fécondation externe, une facilité de manipulation génétique et une transparence corporelle jusqu’à la maturité précoce, ce qui facilite une myriade d’applications d’imagerie¹. Contrairement au processus simple consistant à administrer des médicaments directement dans l’eau pour les embryons et les larves de poisson-zèbre, l’administration de médicaments aux poissons-zèbres adultes présente une entreprise plus complexe et plus....

Protocole

Toutes les procédures effectuées ont été approuvées par le comité institutionnel de soins et d’utilisation des animaux de la Mayo Clinic, conformément aux normes décrites dans le « Guide pour le soin et l’utilisation des animaux de laboratoire » (National Academies Press, 2011). Tous les poissons-zèbres de l’étude appartiennent à la souche Wild Indian Karyotype (WIK). Les détails des réactifs et de l’équipement utilisé pour l’étude sont répertoriés dans la table des matériaux.

1. Préparation et stockage de la solution mère de doxorubicine

1. Obtenez le stock de doxorubicine d’une source commerciale.<....

Discussion

Différente des deux méthodes d’injection IP existantes ^4,10, la nouvelle méthode d’injection IP se caractérise par les caractéristiques distinctes suivantes. Tout d’abord, un angle de pénétration unique de l’aiguille est utilisé (proche de zéro) ; deuxièmement, l’aiguille pénètre dans le poisson par un emplacement unique, c’est-à-dire un trou naturel sur la surface ventrale d’un poisson, ce qui faciliterait l’injection ; et .......

matériels

Name	Company	Catalog Number	Comments
10 μL NanoFil-syringe	World Precision Instruments, Inc	NANOFIL	injection tool
34 G needle	World Precision Instruments, Inc	NI34BV-2	injcetion tool
60 mm Petri dish	fisher scientific/fisherbrand	FB0875713A	placing the sponge
Dissecting microscope	Nikon	SMZ800	Injceting the Dox
Doxorubicin hydrochloride	Sigma	D1515-10MG	drug for creating DIC model
Echocardiography	VISUAL SONICS	Vevo 3100	measuring cardiac function
Foam Sponge	Jaece Industries	L800-D	placing the fish
Hank's balanced salt solution (HBBS)	Thermo Fisher	14025076	Vehicle for Dox
Microcentrifuge	southernlabware	MyFuge/C1012	collect the Dox solution
Precision Balance Scale	Torbal	AD60	Digital scales
Tricaine	Argent	MS-222	Anesthetizing fish
Tube	Eppendorf	1.5 mL	storage
vevo LAB  software	FUJIFILM VISUAL SONICS	5.6.0	quantification of the heart