Modifier les niveaux d’acide folique ou de choline dans l’alimentation maternelle pour étudier l’impact des carences sur les résultats de santé de la progéniture

Résumé

Ce protocole décrit la méthode de réduction de l’apport alimentaire en acide folique ou en choline chez les souris femelles avant la grossesse dans le but d’étudier l’impact de l’alimentation maternelle sur les résultats de santé de la progéniture.

Résumé

L’alimentation maternelle pendant la grossesse et l’allaitement joue un rôle important dans le développement neurologique de la progéniture. Le métabolisme à un carbone (1C), qui s’articule autour de l’acide folique et de la choline, ainsi que d’autres vitamines B, joue un rôle clé lors de la fermeture du tube neural du fœtus en développement. Cependant, l’impact de ces carences nutritionnelles maternelles pendant la grossesse sur les résultats de santé de la progéniture après la naissance reste relativement indéfini. De plus, les carences alimentaires maternelles en acide folique ou en choline peuvent avoir un impact sur d’autres résultats de santé chez la progéniture, ce qui en fait un modèle précieux. Ce protocole vise à décrire la procédure à suivre pour induire une déficience du métabolisme 1C chez les souris femelles par des modifications alimentaires. Les femelles sont soumises à un régime alimentaire au sevrage, jusqu’à l’âge de 2 mois, pendant 4 à 6 semaines avant l’accouplement et restent au régime tout au long de la gestation et de l’allaitement. La progéniture de ces femelles peut être évaluée pour les résultats de santé. Les femelles peuvent être utilisées plusieurs fois pour générer une progéniture, et les tissus des femelles peuvent être collectés pour mesurer les métabolites 1C. Ce protocole donne un aperçu de la façon d’induire des carences alimentaires maternelles en acide folique ou en choline afin d’étudier les résultats de santé de la progéniture.

Introduction

L’alimentation maternelle pendant la grossesse et l’allaitement joue un rôle essentiel dans le développement de la progéniture. Le métabolisme à un carbone (1C) est un réseau métabolique clé qui intègre les signaux nutritionnels à la biosynthèse, à l’homéostasie redox et à l’épigénétique. L’acide folique et la choline sont des composants centraux du 1C qui jouent un rôle important dans la fermeture du tube neural. Il est largement recommandé aux femmes de prendre des suppléments d’acide folique et de choline pendant leurs années de procréation¹. Bien que le rôle critique de l’acide folique dans le développement du fœtus soit clairement établi, ....

Protocole

Ce protocole a été approuvé et tous les sujets animaux ont été utilisés conformément aux directives du Comité institutionnel de soin et d’utilisation des animaux de l’Université Midwestern (Protocole 2983). Des souris femelles C57BL/6J, âgées de 2 mois (poids corporel, ~20 g), ont été utilisées dans cette étude. En général, les souris femelles en âge de procréer peuvent être utilisées¹⁰. Pour éviter les effets de portée, plusieurs femelles doivent être utilisées pour chaque régime¹¹. Les détails des réactifs et de l’équipement utilisés dans l’étude sont énumérés dans la table des matériaux.

Discussion

Lors de la mise en œuvre de ce protocole dans les laboratoires de recherche, il y a plusieurs notes importantes que les chercheurs doivent prendre en compte avant de commencer les expériences. Tout d’abord, dans la fabrication d’un régime alimentaire, il faut disposer d’un délai suffisant pour fabriquer le régime avant le début de l’étude expérimentale. Les délais de livraison peuvent varier d’une entreprise à l’autre, et l’expédition du régime doit également être prise en compte. Les souris f.......

matériels

Name	Company	Catalog Number	Comments
1.5 mL tubes	Eppendorf
C57BL/6 Female Mice	Charles River	27	Mice can be bred in house as well.
Choline Deficient Diet	Envigo	TD.06119
Control Diet	Envigo	TD.190790
EDTA tubes
Folic Acid Deficient Diet	Envigo	TD.01546
GraphPad prism			https://www.graphpad.com/features
Housing for rodents	Lab Products, LLC	One CageVentilated Racks & Cages
Liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS)	SCIEX, Framingham, MA	5500 QTrap
Ultra-performance liquid chromatography (UPLC)	Shimadzu, Columbia, MD, USA	Nexera