Placement périorbitaire d’une sonde laser Doppler pour la surveillance du débit sanguin cérébral avant l’occlusion de l’artère cérébrale moyenne chez des modèles de rongeurs

Résumé

Une intervention chirurgicale mini-invasive est présentée ici, qui consiste à placer la sonde laser Doppler sur le crâne au-dessus de la région distale de l’artère cérébrale moyenne (ACM), une position périorbitaire adaptée aux rats et aux souris, afin d’évaluer le flux sanguin lors de l’occlusion transitoire de l’ACM.

Résumé

L’occlusion de l’artère cérébrale moyenne (MCAO) est la méthode de référence pour la modélisation préclinique de l’AVC ischémique chez les rongeurs. Cependant, le succès de l’occlusion n’est pas garanti, même par les mains chirurgicales les plus habiles. Les erreurs se produisent principalement lorsque le filament n’est pas placé à la bonne profondeur et comprennent des cas d’absence d’infarctus ou de perforation du vaisseau, ce qui peut entraîner la mort. La flowmétrie laser Doppler (LDF) est une technique fiable qui fournit une rétroaction en temps réel sur le débit sanguin cérébral régional (CBF) pendant la procédure MCAO. Ici, nous démontrons une technique rapide de placement périorbitaire d’une sonde laser Doppler pour la mesure du CBF chez la souris et le rat. Notre raison d’être était de simplifier la mise en œuvre de la LDF, en encourageant une utilisation généralisée pour une meilleure fiabilité chirurgicale. La technique élimine le besoin d’amincissement du crâne et d’équipement spécialisé, avec un placement dans la région périorbitaire plutôt que dorsale, favorisant l’efficacité et la facilité d’adoption. Le protocole décrit ici englobe les préparations préchirurgicales, la mise en place de la sonde Doppler périorbitaire et les soins postopératoires. Les résultats représentatifs comprennent des représentations visuelles des éléments procéduraux ainsi que des tracés LDF représentatifs illustrant des chirurgies MCAO réussies, avec des cas de placement infructueux du filament entraînant des complications. Le protocole illustre la LDF dans la confirmation du placement correct du filament et offre une procédure simplifiée par rapport aux méthodes alternatives.

Introduction

La méthode d’occlusion de l’artère cérébrale moyenne (MCAO) a été largement utilisée chez les rongeurs depuis son introduction dans la communauté scientifique pour être appliquée aux rats en 1986¹ avec l’adaptation Longa décrite en 1990², et les adaptations pour les souris peu après³. Bien qu’elle ne soit pas décrite dans la publication de Longa, l’utilisation du signal de flowmétrie laser Doppler (LDF) pour confirmer le placement du filament a rapidement été décrite dans la littérature⁴. L’emploi de la LDF pendant la procédure MCAO est lar....

Protocole

Des souris et des rats adultes ont été utilisés pour illustrer ce protocole (25 g, C57BL/6J, Jackson Laboratories ; 250 g, Sprague Dawley, Envigo). La manipulation des animaux et les procédures expérimentales ont été effectuées avec l’approbation et conformément au comité institutionnel de protection et d’utilisation des animaux de l’Université de l’Arizona, aux lois nationales et aux principes de soins aux animaux de laboratoire¹¹. Les rats et les souris ont été logés selon un horaire de 12 heures de lumière et d’obscurité (de 7 h à 19 h) avec de la nourriture et de l’eau disponibles à volonté.

Discussion

Le MCAO est la procédure de référence pour la modélisation de l’occlusion et de la reperfusion de l’artère cérébrale chez les rongeurs et a été la pierre angulaire de la recherche préclinique sur l’AVC, permettant l’induction d’une ischémie focale chez les rongeurs pour imiter la physiopathologie de l’AVC humain. Il s’agit d’une intervention chirurgicale exigeante avec une variabilité inter- et même intra-chirurgicale importante. Bien qu’il n’y ait aucune.......

matériels

Name	Company	Catalog Number	Comments
curved spring scissors	Castroviejo	1501710
forceps #5	Fine science tools	11250-20
forceps #5/45	Fine science tools	1151-35
Forcepts Cautery tool	Conmed	M18019-01
Laboratory tape	Fisherbrand Labeling Tape	15-950
Laser Doppler Monitor	Moore Instruments	MOORVMS-LDF
LDF software	Perisoft for Windows or moorSOFT	NA
Mouse clippers	Philips Norelco	MG7910
Periflux System 4000, probe 407	Perimed	equipment no longer available
plastic wrap	Glad	press n seal
Rat clippers	oster	A5 or similar
Small rodent anesthesia	JD Medical	custom order
small scissors	excelta	362 Sissors or similar
Temperature monitor system with probe	Physitemp	TCAT-2AC Controller