Immunodosage fluorescent à flux latéral basé sur des nanobilles de points quantiques

Résumé

Ici, nous décrivons un protocole pour la préparation de nanobilles de points quantiques (QDNB) et la détection de biomarqueurs de maladies à l’aide de bandelettes d’immunodosage à flux latéral basées sur QDNB. Les résultats des tests peuvent être évalués qualitativement sous un éclairage à la lumière UV et mesurés quantitativement à l’aide d’un lecteur de bande fluorescente dans les 15 minutes.

Résumé

Les points quantiques, également connus sous le nom de nanocristaux semi-conducteurs, sont de nouveaux marqueurs fluorescents pour l’imagerie et la détection biologiques. Cependant, les conjugués d’anticorps à points quantiques de petites dimensions (~10 nm), préparés par des procédures de purification laborieuses, présentent une sensibilité limitée dans la détection de certains marqueurs de maladies à l’état de traces à l’aide de bandelettes d’immunodosage à flux latéral. Ici, nous présentons une méthode de préparation de nanobilles de points quantiques (QDNB) à l’aide d’une méthode d’évaporation d’émulsion en une étape. À l’aide du QDNB tel que préparé, un test immunologique fluorescent à flux latéral a été fabriqué pour détecter les biomarqueurs de la maladie en utilisant la protéine C-réactive (CRP) à titre d’exemple. Contrairement aux nanoparticules à point quantique unique, les conjugués nanobilles-anticorps sont plus sensibles en tant que marqueurs d’immunodosage en raison de l’amplification du signal en encapsulant des centaines de points quantiques dans une nanobille composite polymère. De plus, la plus grande taille des QDNB facilite la séparation par centrifugation lors de la conjugaison des QDNB avec des anticorps. L’immunodosage fluorescent à flux latéral basé sur les QDNB a été fabriqué, et la concentration de CRP dans l’échantillon a été mesurée en 15 min. Les résultats des tests peuvent être évalués qualitativement sous un éclairage à la lumière UV et mesurés quantitativement à l’aide d’un lecteur fluorescent dans les 15 minutes.

Introduction

Les bandelettes d’immunodosage à flux latéral (LFIA) constituent des outils de détection rapide essentiels au point de service ^1,2, en particulier dans le dépistage des maladies pendant les épidémies. Cependant, les bandelettes de test LFIA traditionnelles à base d’or colloïdal présentent une faible sensibilité de détection et ne fournissent que des résultats qualitatifs³. Pour améliorer la sensibilité de détection du LFIA, diverses nouvelles nanoparticules ont émergé, notamment du latex coloré ^4,5, des nanoparticules fluorescentes^à

Protocole

L’étude a été approuvée par le Conseil d’examen institutionnel de l’hôpital des maladies de la peau de Shanghai (n° 2020-15). Toutes les procédures expérimentales impliquant des échantillons de sang humain ont été menées dans un laboratoire de niveau de biosécurité II. Les détails des réactifs et de l’équipement utilisés dans cette étude sont énumérés dans la table des matériaux.

1. Préparation des nanobilles de QDs

REMARQUE : Pour la synthèse de nanobilles QD, une technique d’évaporation émulsion-solvant a été utilisée pour synthétiser des nanobilles QD, avec un rapport entre la p....

Discussion

Ici, nous décrivons un protocole pour la préparation de nanobilles de points quantiques (QDNB)²⁷ et l’utilisation de QDNB pour la préparation d’immunoessais fluorescents à flux latéral (LFIA). La mesure qualitative et quantitative de la CRP dans les échantillons est démontrée. Cette LFIA basée sur QDNB peut également être appliquée à d’autres biomarqueurs de maladies^25,32, toxines alimentaires^29,30

matériels

Name	Company	Catalog Number	Comments
(dimethylamino)propyl)-N’-ethylcarbodiimide hydrochloride	Sigma-Aldrich	03450
Absorbance paper	Kinbio Biotech	CH37K
Bovine serum albumin	Sigma-Aldrich	B2064
Casein	Sigma-Aldrich	C8654
CdSe/ZnS quantum dot	Suzhou Mesolight Inc.	CdSe/ZnS-625
Choloroform	Sino Pharm	10006818
CRP antibody	Hytest Biotech	4C28
Fluorescent lateral flow assay reader	Suzhou Helmence Precision Instrument	FIC-H1
Glass fiber pad	Kinbio Biotech	SB06
Goat anti-rabbit IgG	Sangon Biotech	D111018
Nitrocellulose membrane	Satorious	CN140
Poly(styrene-maleic anhydride) copolymer	Sigma-Aldrich	S458066
Rabbit IgG	Sangon Biotech	D110502
Sodium dodecyl sulfate	Sino Pharm	30166428
Sodium hydroxide	Sino Pharm	10019718