Pour commencer, écrasez les matières médicinales Pheretima, Periplaneta americana et Hirudo avec un moulin à herbes. Tamiser la poudre médicinale à travers des tamis de médicaments standard du numéro deux et du numéro quatre. Recueillir la poudre entre les deux tamis pour obtenir l’échantillon de poudre requis.
Prenez un gramme de poudre dans un tube à centrifuger en plastique de 50 millilitres. Ajouter 20 millilitres de solution d’acide trichloracétique à 5 % et homogénéiser à 1 000 tr/min pendant une minute avec un homogénéisateur à dispersion à grande vitesse. Après homogénéisation, centrifuger l’homogénat à 1 717 G pendant cinq minutes à température ambiante et filtrer le surnageant à travers un entonnoir absorbant en verre trempé dans un ballon jaugé de 50 millilitres.
Après avoir répété le processus d’extraction deux fois avec 15 et 10 millilitres de solution d’acide trichloracétique à 5%, mélanger les filtrats et porter le volume à 50 millilitres avec une solution d’acide trichloracétique à 5%. Ensuite, ajoutez avec précision deux millilitres de solution d’hydroxyde de sodium et 0,5 gramme de paraffine solide dans des flacons de 20 millilitres dans des flacons d’espace de tête de 20 millilitres. Ensuite, placez-les dans un four à 70 degrés Celsius pendant environ 30 minutes.
Sortez les flacons et laissez-les refroidir à température ambiante pour que la paraffine se solidifie. Pour traiter l’espace de tête de l’échantillon, ajouter deux millilitres de chaque solution d’extraction d’échantillon dans les flacons contenant de la paraffine solidifiée. Appuyez sur le capuchon et scellez le flacon.
Placez les flacons d’espace de tête scellés sur le SMGC pour la mesure. Pour obtenir la courbe étalon, aspirer une série de deux millilitres de solution étalon de triméthylamine sur la couche de paraffine solidifiée. Placez les flacons d’espace de tête scellés sur la machine pour la mesure de la triméthylamine.
Pour effectuer le test de précision, aspirez deux millilitres de solution étalon de triméthylamine de 0,1 milligramme par millilitre sur la couche de paraffine solidifiée. Effectuer six essais parallèles dans la machine en suivant les instructions du fabricant. Pour l’expérience sur le taux de récupération, cuire plusieurs lots de poudre d’échantillon dans une étuve jusqu’à ce qu’aucune triéthylamine ne soit détectée dans le SMGC, comme démontré précédemment.
Ensuite, prenez chaque gramme de poudre cuite au four et fine dans des tubes à centrifuger en plastique séparés de 50 millilitres. Ajouter 50 microlitres de solution étalon de triméthylamine dans tous les tubes et extraire avec une solution d’acide trichloracétique à 5% comme démontré précédemment. Le temps de rétention de la triméthylamine s’est avéré être de 2,3 minutes avec un pic aigu et aucune interférence d’autres impuretés.
Les échantillons de Pheretima, Periplaneta americana et Hirudo soumis à des tests de récupération par séchage pour réduire la triéthylamine dans les herbes ont montré des taux de récupération moyens de 84,49, 94,66 et 85,67% respectivement. La triéthylamine a été détectée dans neuf lots d’herbes avec des concentrations allant de 13,23 à 271,63 milligrammes par kilogramme.
