Placez les plaques de décantation TSA et SAB étiquetées près de la zone de travail, mais dans une zone qui n’interférera pas avec les tests. Documentez l’heure de début de l’échantillonnage. De façon aseptique, ouvrez les deux assiettes en plaçant les couvercles sur une surface propre dans l’enceinte de sécurité biologique, loin de l’aire de travail, pendant quatre heures pour éviter que la gélose ne sèche.
À la fin du traitement, fermez les couvercles des plaques et documentez le temps d’arrêt de l’échantillonnage. En vrac, emballez les assiettes et incuber les cultures. Pour l’échantillonnage du bout des doigts gantés, procurez-vous deux plaques TSALT étiquetées.
Retirez de manière aseptique le couvercle des plaques et placez-le sur une surface de travail propre, loin de la zone d’échantillonnage. Rouler doucement le coussinet de chaque doigt et pouce sur la surface de la plaque. Utilisez une force suffisante pour faire de légères dépressions sur la gélose sans fissurer la surface de la gélose.
Replacez le couvercle de manière aseptique sur la plaque. Après avoir désinfecté les mains à la fin de l’échantillonnage, mettre les assiettes dans des sacs lâches et incuber les cultures. Pour l’inoculation directe, selon la méthode de la pharmacopée des États-Unis, placer les plaques de décantation TSA et SAB dans l’enceinte de biosécurité.
Après avoir préparé l’armoire et mis en scène les matériaux, documentez l’heure de début de l’échantillonnage. Obtenir l’article d’essai et le bouillon de soja tryptique associé et les flacons de milieu thioglycollate liquide. Si les bouteilles ont un septum, retirez les bouchons protecteurs de chaque bouteille et essuyez le septum avec une lingette imbibée d’alcool stérile.
Vortex l’objet d’essai pour assurer une suspension homogène et inoculer les flacons avec un volume validé de l’article d’essai à l’aide d’une seringue stérile et d’une aiguille hypodermique. Essuyez le septum avec une lingette imbibée d’alcool stérile et insérez une unité de ventilation stérile pour permettre l’échange d’air pendant l’incubation. Répétez les étapes pour chaque article de test de cette session.
Fermez de manière aseptique les plaques de décantation TSA et SAB et documentez l’heure de fin de l’échantillonnage avant d’effectuer l’échantillonnage du bout des doigts gantés. Essuyez les gants avec de l’alcool isopropylique stérile à 70%, ensachez les assiettes et incuber les cultures. Transférer tous les matériaux d’essai hors de l’enceinte de sécurité biologique.
De même, pour l’inoculation directe, en suivant la méthode alternative d’essai de stérilité des NIH, placer les plaques de décantation TSA et SAB dans l’armoire de biosécurité et documenter l’heure de début de l’échantillonnage. Procurez-vous l’article de test et la plaque IFA Plus associée, IFN Plus et SAB. Retirez les capuchons protecteurs des flacons IFA Plus et IFN Plus et essuyez le septum avec une lingette imbibée d’alcool stérile.
Après avoir vortex l’article d’essai, inoculer les flacons avec le volume validé de l’article d’essai à l’aide d’une seringue stérile et d’une aiguille hypodermique et essuyer à nouveau le septum. Incuber les bouteilles sur l’instrument BACT/ALERT Dual T. À l’aide d’un pipetter, inoculer la plaque SAB avec une quantité validée de l’article d’essai et une traînée pour l’isolement à l’aide d’une boucle stérile.
Laisser reposer pendant 10 minutes pour s’assurer que l’échantillon ne coule pas sur le couvercle de la plaque lorsqu’il est retourné pour l’incubation Placez chaque plaque SAB inoculée avec un article d’essai dans un sac en plastique. Attachez-les lâchement. Fermer de manière aseptique les plaques de décantation TSA et SAB.
Documentez l’heure de fin de l’échantillonnage sur les plaques et effectuez l’échantillonnage du bout des doigts gantés. Après l’échantillonnage, essuyez les gants avec 70% d’alcool. Ensachez les assiettes en vrac après avoir essuyé les gants avec de l’alcool et incuber les cultures.
Une plaque de décantation de l’air TSA illustrant une seule colonie d’un contaminant cultivé pendant la surveillance passive du processus d’air dans l’enceinte de sécurité biologique est présentée ici. La plaque d’échantillonnage de surface TSALT avec trois unités formant colonie de deux morphologies de colonies distinctes est représentée sur cette figure. La culture de surface TSALT avec une seule colonie sur le bord de la plaque indique une mauvaise manipulation aseptique pendant le processus d’échantillonnage.
La méthode correcte pour obtenir des échantillons du bout des doigts gantés en utilisant la plus grande surface de chaque doigt ou pouce est illustrée dans cette image. Le processus incorrect où seul le bout du doigt est échantillonné est illustré ici. Un exemple de boules de moisissure visibles à l’œil nu qui n’ont pas été détectées automatiquement par le système BACT/ALERT est présenté ici.
Sur la base de ces résultats, l’inspection visuelle terminale de toutes les bouteilles BACT/ALERT et l’ajout de la plaque SAB pour la culture fongique à l’aide de la méthode alternative de test de stérilité des NIH sont recommandés.
