Pour commencer la transfection cellulaire, ajoutez 20 microlitres de suspension cellulaire HeLa aux puits de plaques de 384 puits contenant du siRNA dilué pour ensemencer 700 cellules HeLa par puits. Après une heure d’incubation à température ambiante, placez la plaque de puits dans un incubateur pendant 72 heures à 37 degrés Celsius et 5% de dioxyde de carbone. Pour incorporer BrdU dans les cellules transfectées, ajouter 10 microlitres de solution de BrdU à 90 micromolaires à chaque puits après 56 heures de transfection de siRNA.
Incuber les cellules pendant 16 heures à 37 degrés Celsius et 5% de dioxyde de carbone. La spécificité de l’incorporation de BrdU dans l’ADN mitochondrial des cellules HeLa a été étudiée en utilisant des cellules rho0 dépourvues d’ADN mitochondrial.
