Pour commencer le marquage des mitochondries, préparez une solution micromolaire de 20 micromolaires de BrdU dans du DMEM avec 10% de sérum bovin fœtal ou FBS. Ajoutez ensuite le colorant de suivi des mitochondries pour ajuster la concentration finale à 1,1 micromolaire. Après 15 heures, ajoutez 10 microlitres de la solution de colorant de suivi des mitochondries à la suspension cellulaire HeLa contenant des puits.
Incuber les cellules pendant une heure. Les conditions utilisées pour marquer les molécules d’ADN nouvellement synthétisées avec BrdU ont permis la détection de l’ADN marqué BrdU dans les mitochondries des cellules HeLa. Le signal obtenu avec les anticorps anti-BrdU était spécifique et n’a été observé que dans les cellules traitées avec BrdU.
Quel que soit le traitement BrdU, aucun signal d’anticorps anti-BrdU ou anti-ADN n’a été détecté dans les mitochondries des cellules de la rangée zéro. La quantification du signal fluorescent des anticorps anti-BrdU a indiqué que les cellules de la rangée zéro traitées avec BrdU présentaient le même faible niveau de fluorescence que les cellules BrdU non traitées, tandis que le signal pour les lignées parentales A549 et HeLa était 50 fois plus élevé.
