Pour commencer l’ajout de l’anticorps primaire, aspirer l’albumine sérique bovine ou BSA des cellules HeLa transfectées fixes et bloquées en laissant 10 microlitres de solution BSA dans le puits. Ajoutez ensuite 10 microlitres de la solution d’anticorps primaires préparée dans 3% BSA dans du PBS et incuber la plaque dans l’obscurité à quatre degrés Celsius pendant la nuit. Après l’incubation, rincez chaque puits quatre fois avec 100 microlitres de PBS, en laissant 10 microlitres après le dernier lavage.
Ensuite, ajoutez 10 microlitres de solution d’anticorps secondaires à la plaque de 384 puits. Utilisez des anticorps spécifiques aux isotypes conjugués aux fluorochromes, tels que Alexa Fluor 488 et Alexa Fluor 555. Après avoir incubé la plaque dans l’obscurité pendant une heure, rincez chaque puits quatre fois avec 100 microlitres de PBS et laissez 50 microlitres de PBS dans le puits après le dernier lavage.
L’utilisation d’anticorps anti-ADN a permis de surveiller la distribution de l’ADN mitochondrial dans la cellule dans les conditions expérimentales données. La régulation négative du facteur de transcription mitochondrial A TFAM a conduit à des changements drastiques dans la distribution de l’ADN mitochondrial avec moins de taches d’ADN mitochondrial que dans les cellules témoins. La quantification du signal fluorescent moyen de l’anticorps anti-ADN a montré une augmentation de plusieurs fois lors du silençage TFAM par rapport aux autres conditions testées.
