Centrifuger l’échantillon décongelé non emballé à 10 000 g pendant deux minutes à température ambiante. Observez l’échantillon pour identifier les précipitations, la couleur et l’état. Réchauffez la plaque préparée de 1 536 puits à 23 degrés Celsius, puis centrifugez-la à 150 g pendant cinq minutes.
À l’aide d’un microscope à fond clair, prenez des photos de l’assiette contenant le cocktail uniquement pour l’utiliser comme témoin négatif. Distribuer 200 nanolitres de l’échantillon à chaque puits à l’aide d’un robot de manipulation de liquide. Après avoir centrifugé la plaque à 150g, incuber à la température souhaitée pendant six semaines.
Capturez des images en fond clair des plaques avec des échantillons à intervalles hebdomadaires du jour 1 à la semaine 6. Effectuez l’imagerie sonique avec le SHG et l’UV-TPEF. L’imagerie automatisée des plaques tout au long de la durée de l’expérience a permis l’identification en fond clair des cristaux à croissance rapide et lente.
L’imagerie UV-TPEF indiquait la nature protéique, tandis que l’imagerie SHG confirmait la nature cristalline de l’échantillon. L’imagerie sonique a permis d’identifier des cristaux obscurcis par les précipitations ou un film qui ne produisent pas de signal SHG, ou des microcristaux qui peuvent être confondus avec le précipité. Des cristaux non protéiques dépourvus de signal UV-TPEF mais présentant de forts signaux de fond clair et SHG ont également été identifiés.
