Pour commencer, générez une construction CDNA CaV1.1 de type sauvage et marquée par fluorescence. Ici, un revêtement plasmidique pour la protéine fluorescente verte améliorée ou la sous-unité alpha marquée EGFP du lapin Cav1.1 est utilisé. La présence du promoteur du cytomégalovirus permet une forte efficacité de transfection dans les fibres musculaires.
Introduire la substitution de cystine dans le canal qui serait suivie par fluorométrie à l’aide d’une trousse de mutagénèse dirigée sur le marché. Ici, les cystéines sont insérées à une position correspondant à l’interface extracellulaire membranaire de l’un des quatre S4 du canal. À l’aide de l’observation GFP et de l’enregistrement du courant ionique, confirmer que ni les cystéines insérées ni la présence de colorant thiol-réactif n’affectent la dépendance de tension et la conductance du canal.
