Pour commencer l’analyse pharmacologique de l’Arabidopsis thaliana F1 bicolore, disséquez et retirez les cotylédons de plantules transgéniques âgées de sept jours. Ajouter 500 microlitres d’une solution de Brefeldin A de 30 micromolaires, ou BFA, dans un tube microcentrifuge de 1,5 millilitre. Immergez-y les semis disséqués.
Fixez fermement une seringue de 10 millilitres au tube de microcentrifugation et appliquez un vide pendant une minute. Retirez la seringue avant d’incuber l’échantillon dans la solution pendant 30 minutes avant l’imagerie. Ensuite, plongez le semis disséqué de sept jours dans du wortmannin de 25 millimolaires.
Appliquez le vide pendant une minute avant d’incuber l’échantillon immergé pendant 30 minutes. L’examen des voies de trafic ERL-1 dans les plantes transgéniques a montré que 30 minutes d’exposition à la solution Brefeldin A ont entraîné la détection d’ERL-1-YFP dans de grands compartiments appelés corps BFA. Il a indiqué que Brefeldin A pourrait bloquer le trafic ERL-1 suggérant le recyclage ou l’endocytose de ERL-1.
Lorsque les transgéniques ont été traités avec de la wortmannine pendant 30 minutes, des structures en forme d’anneau appelées corps WM ont été mises en évidence par ERL-1-YFP. Elle a montré que les ERL-1-YFP étaient transportés vers des corps multivésiculaires, ce qui indique que ERL-1 suivait la voie des vacuoles pour se dégrader.
