Immunofluorescent Detection of Adipose-Derived Stem Cell Expression Markers

Commencez par laver les cellules souches adipeuses murines dans une plaque à six puits avec deux millilitres de tampon de lavage. Ajouter un millilitre de réactif bloquant après l’incubation et le lavage des cellules trois fois. Incuber les cellules avec une agitation lente pendant 20 minutes.

Ajouter 200 microlitres d’anticorps primaires à chaque puits et incuber pendant la nuit à quatre degrés Celsius. Après avoir lavé les plaques trois fois comme démontré précédemment, incuber avec 200 microlitres des anticorps secondaires. Contre-colorer les noyaux cellulaires avec 100 microlitres de DRAQ7 pendant 20 minutes après avoir lavé les plaques trois fois.

Répétez le lavage et montez les lames. Visualisez les lames montées sous microscopie confocale à épifluorescence. Les cellules souches dérivées du tissu adipeux étaient positives à 100 % pour les marqueurs de surface CD9 dans tous les sous-passages testés.

Toutes les cellules exprimaient des marqueurs CD63 dans les sous-passages un, trois et neuf, tandis que 49,3% des cellules l’exprimaient dans le passage sept. Les marqueurs CD34 étaient absents dans les passages un, sept et neuf, mais visibles dans le passage trois.