Pour cette étude, utilisez de petites cicadelles brunes ou des SBPH élevés dans des plants de riz. Une fois que les cultures sont prêtes, mettez les SBPH cultivés dans un tube à centrifuger et placez-les dans un bain de glace pendant 10 à 30 minutes. Ensuite, placez un SBPH congelé sur une lame de verre sous un stéréomicroscope avec son abdomen tourné vers le haut et ajustez la mise au point sur ses six pattes.
Préparez deux pincettes de haute précision avec des pointes ultra fines. À l’aide d’une pince à épiler, appuyez sur le corps de l’insecte pour le maintenir en place et retirez soigneusement une jambe avec l’autre pince à épiler. Appuyez ensuite doucement sur la poitrine de l’insecte, permettant à l’hémolymphe de circuler dans la plaie.
Pour recueillir l’hémolymphe, préparez une micropipette en plaçant un tube capillaire de microlitre dans le bulbe de pipette. Placez le tube capillaire près de la plaie de l’insecte, en tenant l’ampoule de la pipette à micropipette. Touchez l’extrémité capillaire de l’hémolymphe exsudative et recueillez-la.
Une fois que le tube capillaire atteint la ligne d’échelle souhaitée, bloquez légèrement le petit trou sur l’ampoule de la pipette avec le doigt pour arrêter le processus d’absorption. Ensuite, déchargez l’hémolymphe recueillie dans 100 microlitres de tampon PBS. La précision de la collecte de l’hémolymphe a été confirmée via SDS-PAGE, qui a montré une teneur en protéines similaire dans les trois échantillons d’hémolymphe, prélevés séparément.
Pour les larves, la concentration totale de protéines était d’environ 3,7 milligrammes par millilitre. Dans les SBPH femelles et mâles adultes, les concentrations de protéines étaient d’environ 3,5 et 3,6 milligrammes par millilitre respectivement, ne montrant aucune différence significative entre les trois échantillons. L’hémolymphe larvaire a montré des hémocytes de deux à 20 nanomètres.
De plus, la concentration cellulaire était comparable dans les trois échantillons d’hémolymphe recueillis.
