Pour effectuer la cryolésion myomère sur le poisson zèbre, utilisez une cryosonde en acier inoxydable fabriquée sur mesure. Pour éviter les engelures lors de la manipulation de la sonde pendant la procédure, insérez la poignée de la sonde dans une pointe de pipette et fixez-la en l’enveloppant de ruban adhésif. Avant de commencer la procédure de cryolésion, préparez un bécher pour la solution de travail d’anesthésie, une cuillère pour manipuler le poisson, une éponge humide et un réservoir avec de l’eau du système pour la récupération post-procédure du poisson.
Préparez la solution mère d’anesthésie en suivant les étapes indiquées à l’écran. Ajoutez ensuite quatre millilitres de la solution mère préparée à 100 millilitres d’eau du système dans un bécher pour préparer la solution de travail à base de tricaïne. Pour commencer la procédure de cryolésion, immergez la sonde dans de l’azote liquide pendant au moins trois minutes.
Mouillez l’éponge dans l’eau du système et placez-la sur une surface plane. Ensuite, une à deux minutes après le transfert d’un seul poisson zèbre adulte dans la solution de travail à base de tricaïne, confirmez son absence de réponse en touchant doucement le poisson avec la cuillère. Placez le poisson anesthésié sur l’éponge humide.
Localisez le pédoncule caudale postérieur à la nageoire anale et antérieur à la nageoire caudale. À ce stade, retirez la cryosonde de l’azote liquide. Secouez doucement la sonde pour vous assurer qu’il ne reste pas d’azote liquide résiduel sur l’extrémité.
Placez le bord de la spatule perpendiculairement au corps sur le pédoncule caudal. Gardez la sonde dans cette position pendant six secondes sans appliquer de pression, avant de libérer la cryosonde du tissu. Ensuite, transférez le poisson dans l’eau du système dans le réservoir de récupération.
Surveillez le poisson pendant qu’il reprend sa respiration et sa natation après s’être réveillé de l’anesthésie. Si aucun mouvement operculaire ne se produit après 30 secondes, stimuler le poisson en pipetant l’eau du système dans les branchies jusqu’à ce que l’animal commence à respirer par lui-même. L’enregistrement vidéo des poissons témoins et cryoblessés un jour après la blessure ou DPCI a révélé que même si les poissons cryoblessés nageaient moins activement, ils ne présentaient aucun mouvement anormal, tel que tourbillonnement, convolution ou équilibre réduit.
Dans le système d’élevage, leur position dans l’aquarium et leur apport alimentaire étaient similaires à ceux des poissons non blessés. Comme observé à 5 DPCI, le comportement normal était toujours persistant, ce qui indique que la procédure de cryoblessure n’a pas gravement affecté le bien-être des animaux.
