Pour commencer, parasitez environ 40 pupes de Lucilia sericata sur des guêpes Nasonia mâles et femelles adultes émergentes accouplées pendant 1,5 jour. Dans les 12 à 24 heures suivant la parasitation, ouvrez soigneusement une extrémité de la coquille nymphale à l’aide d’une aiguille de dissection stérile. Tenez l’autre extrémité de la coquille et localisez l’embryon de guêpe.
Ensuite, transférez l’embryon dans une passoire à cellules stériles humidifiée avec du PBS. Une fois que 20 à 30 embryons ont été transférés, lavez-les avec 1 000 microlitres de solution d’hypochlorite de sodium à 10%, suivie d’un PBS stérile et d’éthanol à 70%. Enfin, lavez-les trois fois avec du PBS stérile.
Ensuite, placez une feuille de maille de polypropylène pré-mouillée avec du PBS dans une plaque de 24 puits. À l’aide d’une petite brosse stérilisée, transférer délicatement les embryons de guêpe de la passoire cellulaire à la feuille de maille en polypropylène. Pour l’élevage des guêpes, ajoutez 50 microlitres de NRM préparé à chaque puits avec une feuille.
Ajoutez ensuite un millilitre d’eau stérile entre chaque puits pour maintenir un environnement humide propice à la croissance. Le lendemain, transférer le treillis de polypropylène contenant la larve d’un puits à un autre à l’aide d’une pince à épiler désinfectée à l’alcool et ajouter 50 microlitres de NRM équilibré. Après neuf à 11 jours d’alimentation, plus de 80% de la larve devrait se développer en nymphes blanches ou jaunes.
Transférez ensuite le treillis sur une plaque de puits propre. Dans la présente étude, le taux de survie des guêpes exemptes de germes de la larve aux pupes a été significativement amélioré par rapport à l’élevage de guêpes exemptes de germes avec la version trois du NRM. De plus, il n’y avait pas de différence dans la période de génération entre les guêpes exemptes de germes et les guêpes élevées de manière conventionnelle.
