Pour commencer, prenez 70 à 80% de cellules Hep-3B confluentes. Retirer 250 microlitres de milieu de chacun des puits et ajouter 50 microlitres de milieu avec le traitement ou le véhicule approprié. Ajouter 50 microlitres de milieu à chaque puits contenant le réactif de coloration et incuber les cellules avec le colorant.
Après avoir retiré le milieu et lavé les cellules avec du PBS préchauffé, fixez les cellules avec 200 microlitres de solution de fixation pendant 15 minutes à température ambiante. Ensuite, décantez la solution fixatrice et lavez brièvement avec 200 microlitres de PBS. Enfin, ajoutez 200 microlitres de PBS.
Gardez les cellules couvertes et protégées de la lumière à quatre degrés Celsius, et l’image dans les 24 heures.
