Filtrer les protéines brutes extraites de l’intestin de Sipunculus nudus à travers une membrane filtrante de 0,22 micromètre. Conservez cet échantillon à quatre degrés Celsius pour une utilisation ultérieure. Emballez la colonne de chromatographie d’affinité à matrice d’agarose arginine en chargeant le milieu de matrice d’agarose arginine dans une colonne de chromatographie vide de cinq millilitres.
De même, chargez la colonne de chromatographie d’affinité de la matrice de l’agarose lysine en chargeant le milieu de la matrice d’agarose lysine dans une colonne de chromatographie vide. Équilibrer les colonnes de chromatographie d’affinité avec de l’eau bidistillée suivie d’un tampon de chlorhydrate de tris. Chargez l’échantillon de protéines filtrées sur la colonne prééquilibrée.
Laver successivement la colonne avec cinq volumes de tampon de chlorhydrate de tris 0,02 molaire avant de l’éluer avec des solutions de chlorure de sodium 0,15-0,25-0,35-0,45-0,55 et 0,65-molaire. Une fois que le pic d’élution apparaît dans l’élution de chlorure de sodium à 0,15 molaire, recueillir les fractions dans des tubes de cinq millilitres. Concentrer l’échantillon d’élution à l’aide d’un filtre ultracentrifuge de trois kilodaltons et stocker cet échantillon à moins 80 degrés Celsius pour une utilisation ultérieure.
Lorsque la solution protéique a été chargée sur la colonne d’affinité de la matrice arginine agarose, le pic d’écoulement continu est apparu d’environ 40 à 66 minutes. Au stade de gradient d’élution, l’élution avec du chlorure de sodium 0,15 molaire a culminé d’environ 94 à 110 minutes. Lorsque la solution protéique a été chargée dans la colonne d’affinité de la matrice de l’agarose lysine, le pic d’écoulement continu est apparu d’environ 38 à 60 minutes.
Au stade d’élution par gradient, l’élution avec du chlorure de sodium 0,15 molaire a culminé de 80 à 86 minutes.
