Pour commencer, préparez l’expérience et le matériel requis pour le montage et le positionnement du poisson zèbre. Au microscope stéréoscopique, observez la larve de poisson-zèbre paralysée pour vérifier que son mouvement s’est arrêté. Évaluez visuellement la santé larvaire en vérifiant son rythme cardiaque.
Ensuite, à l’aide d’une pipette de transfert, placez une seule larve de poisson-zèbre dans le tube microcentrifuge de 1,5 millilitre contenant du gel d’agarose. Versez le gel d’agarose dans la boîte de Petri pour faire une couche d’un à deux millimètres. Transférer la larve du tube microcentrifuge à la boîte de Petri à l’aide d’une pipette de transfert.
Assurez-vous de placer la larve au centre du plat. À l’aide d’une pince, positionnez la larve dans l’orientation souhaitée de manière à ce que la tête et la queue soient plates. Ensuite, à l’aide d’une pince, faites pivoter la larve pour niveler les deux yeux.
Une fois l’alignement terminé, attendez que le gel d’agarose se soit solidifié avant de remplir la boîte de Petri avec de l’eau d’œuf. Placez la capsule avec la larve incrustée sur la platine du microscope pour l’acquisition d’images. Allumez le microscope et localisez la larve au centre du champ de vision.
À l’aide du logiciel d’acquisition d’images, définissez les paramètres d’imagerie. Si l’image est saturée, réduisez la puissance laser. Ensuite, trouvez le cerveau de la larve en déplaçant la scène et déterminez son épaisseur à l’aide du mode Live View du logiciel en modifiant manuellement les plans focaux de haut en bas.
Définissez les limites inférieure et supérieure du volume. Procédez ensuite à l’acquisition de l’image pour le champ de vision défini. Pour l’imagerie structurelle volumétrique, acquérir une image 3D de l’ensemble du cerveau en obtenant des images 2D de chaque plan Z séquentiellement.
Pour l’imagerie fonctionnelle d’un seul plan Z, acquérir des séries chronologiques d’images de l’activité neuronale du cerveau à une certaine profondeur.
