Pour commencer, placez les souris anesthésiées sur la plate-forme chirurgicale. Après avoir coupé les cheveux, appliquez une pommade pour les yeux sur les deux yeux pour les empêcher de se dessécher. Ensuite, fixez les souris sur un appareil stéréotaxique pour les immobiliser.
Faites une petite incision au microscope pour exposer complètement le crâne. Préparez deux seringues de 10 microlitres, l’une contenant de l’ARNsh du récepteur AAV2/5-adénosine 2A, et l’autre contenant du brouillage AAV2/5. Ensuite, utilisez le microscope pour localiser le bregma et le lambda et définissez le point de coordonnées sur la seringue de 10 microlitres en fonction de l’atlas stéréotaxique du cerveau de souris.
Percez un petit trou dans le crâne au point de coordonnées établi. Injecter deux microlitres de virus shRNA du récepteur AAV2/5-adénosine 2A dans le ventricule cérébral par injection latérale à un rythme régulier de 100 nanolitres par minute. Gardez l’aiguille en place pendant 10 minutes avant de la retirer.
Scellez rapidement la peau blessée à l’aide de colle médicale à base de biofibrine pour éviter la perte de virus. Placez la souris sur un coussin chauffant, en maintenant sa température corporelle à environ 37 degrés Celsius pour faciliter la récupération. Injecter deux microlitres de CRE-TAT Recombinase dans chaque ventricule latéral de la souris tomate Arosa L-D-L-T-D pour le groupe expérimental, et deux microlitres de PBS stérile pour le groupe témoin.
Deux semaines après l’injection de CRE-TAT Recombinase, préparer des coupes de tissus congelés, effectuer une coloration nucléaire et préparer la lame pour l’imagerie L’inactivation du récepteur de l’adénosine 2A dans le plexus choroïde chez une souris homozygote à flux de récepteur de l’adénosine 2A, à l’aide de CRE-TAT, a entraîné une diminution des scores cliniques de l’EAE. De même, l’inactivation du plexus choroïde chez des souris de type sauvage à récepteur de l’adénosine 2A, en utilisant l’ARNh AAV2/5, a diminué les scores cliniques de l’EAE. L’analyse QPCR a montré que les niveaux d’ARNm du récepteur de l’adénosine 2A ont diminué dans les groupes AAV2/5 shRNA et CRE-TAT, par rapport à chaque témoin.
L’inhibition du récepteur de l’adénosine 2A, en particulier dans le plexus choroïde, a réduit l’infiltration des cellules immunitaires dans la moelle épinière.
