Pour commencer, posez la souris C57 noire 6 anesthésiée de 8 à 10 semaines sur la paillasse chirurgicale. À l’aide d’une pince émoussée, retirez la langue et tenez-la. Insérez un laryngoscope dans la bouche et visualisez la corde vocale.
Insérez un fil guide dans un cathéter intraveineux de calibre 20. Poussez ensuite doucement le cathéter dans la trachée jusqu’à ce que sa partie de l’aile soit au même niveau que le bout du nez. Connectez la souris au ventilateur et placez-la en position couchée sous une lampe chauffante.
Maintenez la température rectale à 37 degrés Celsius. Après le rasage et la désinfection de la zone chirurgicale, faites une incision cutanée d’un centimètre sur les zones inguinales gauche et droite pour accéder aux artères fémorales. Ensuite, désinfectez et ligaturez l’artère fémorale distale et appliquez une goutte de lidocaïne.
Placez un clip sur l’artère fémorale proximale et faites une petite incision sur l’artère distale par rapport au clip. Insérez un cathéter en polyéthylène 10 dans les artères fémorales gauche et droite. Injecter 50 microlitres d’une solution saline héparinée de 1 à 10 dans chaque ligne artérielle.
Pour éviter la formation de caillots dans la ligne, tournez la souris en position couchée et montez-la sur un chevalement stéréotaxique. Connectez trois électrodes à aiguille au bras gauche, à la jambe gauche et au bras droit pour la surveillance de l’électrocardiogramme. Ensuite, rasez le haut de la tête et stérilisez-le avec trois cycles alternés de tampons d’iode et d’alcool.
Faites une incision cutanée médiane de 2,5 centimètres et utilisez quatre petits écarteurs pour exposer toute la surface du crâne pour l’imagerie cérébrale. Placez ensuite un imageur de contraste laser au-dessus de la tête. Ajustez l’imageur laser de taches pour voir la ligne de base des vaisseaux sanguins cérébraux avant l’arrêt cardiaque.
Avant de provoquer un arrêt cardiaque, remplissez une seringue en plastique d’un millilitre avec 26 microlitres de solution mère de cocktail de réanimation. Une fois que la température corporelle atteint 37 degrés Celsius, ajustez le compteur d’oxygène à 100% pour oxygéner le sang pendant deux minutes. Ensuite, prélevez jusqu’à 200 microlitres de sang par l’artère fémorale droite dans la seringue en plastique contenant le cocktail de réanimation.
Pour provoquer un arrêt cardiaque, coupez l’oxygène et augmentez l’azote à 100% pour induire une anoxie. Éteignez le ventilateur, le vaporisateur d’isoflurane, le régulateur de température et le débitmètre d’azote. Confirmer l’absence de flux sanguin cérébral lors d’un arrêt cardiaque.
En observant l’image du chatoiement laser, ajustez l’oxygène à 100 % et allumez le ventilateur huit minutes après le début de l’arrêt cardiaque. Perfusez immédiatement le sang oxygéné prélevé mélangé au cocktail de réanimation dans la circulation sanguine par l’artère fémorale droite en une minute pour rétablir les signes vitaux tels que la fréquence cardiaque et la pression artérielle. Voir l’image de chatoiement laser pour confirmer la réussite de la reperfusion du cerveau.
Pour la récupération postopératoire, retirez les écarteurs de la tête, appliquez 0,25 % de bupivacaïne sur l’incision cutanée et fermez l’incision à l’aide d’un fil de suture en nylon 6-0. Appliquez ensuite une pommade antibiotique sur la surface fermée de l’incision cutanée. L’induction d’un arrêt cardiaque chez la souris a conduit à une bradycardie sévère dans les 45 secondes.
Après deux minutes d’anoxie, la fréquence cardiaque a considérablement diminué. La pression artérielle est descendue en dessous de 20 millimètres de mercure et le flux sanguin cérébral a cessé. De plus, la température corporelle a lentement chuté à environ 32 degrés Celsius à la fin de l’arrêt cardiaque.
Après l’injection du mélange de réanimation sanguine, toutes les fonctions vitales ont commencé à se rétablir. L’imagerie laser par contraste de speckle a confirmé l’absence totale de flux sanguin dans le cerveau pendant l’arrêt cardiaque, les images photoacoustiques ont permis d’identifier les changements dans le flux sanguin, la structure et l’oxygénation pendant la procédure d’arrêt cardiaque.
