Pour commencer, demandez au patient de jeûner toute la nuit avant le prélèvement de l’échantillon. Le lendemain, ouvrez le kit de test de chaîne. Prenez la capsule et maintenez la boucle au bout de la ficelle.
Collez la ficelle sur la joue du patient. Ensuite, guidez le patient pour placer la capsule sur sa langue près du fond de la gorge et l’avaler avec une gorgée d’eau. Une fois que la capsule a été dissoute dans l’estomac du patient pendant une heure, demandez à un assistant qualifié de retirer soigneusement la ficelle du patient.
Ensuite, placez l’extrémité trempée dans le liquide gastrique dans une solution de conservation d’échantillon d’EST et coupez l’extrémité inférieure de la ficelle. Placez l’échantillon étiqueté portant des tubes de collecte sur un support à tube à essai et un vortex pendant 10 secondes. Retournez la plaque de 32 puits plusieurs fois pour remettre en suspension les billes magnétiques, vortex pendant 10 secondes.
Ensuite, retirez délicatement le plafond en aluminium de la plaque. Transférer 200 microlitres de liquide gastrique de chaque échantillon et l’ADN d’helicobacter pylori comme témoin positif dans les puits séparés. Placez la plaque de 32 puits dans la fente d’échantillon correspondante de la machine d’extraction d’acide nucléique pour l’extraction automatique de l’ADN, après l’extraction et la confirmation de l’ADN.
Placer l’excès de liquide gastrique et les échantillons d’ADN extraits à moins 20 degrés Celsius jusqu’à utilisation, décongeler le mélange réactionnel qPCR sur de la glace et le mélanger en le frappant et en le faisant tourner pour éviter la perte de réactif. Pour chaque échantillon dans une plaque de 32 puits, mélanger 20 microlitres du mélange réactionnel PCR avec des amorces avant et arrière à l’urée, une sonde d’urée et cinq microlitres de l’ADN extrait. Placez la plaque sur la machine qPCR et réglez le programme de thermocycleur. Réglez l’acquisition du signal fluorescent sur FAM l’acquisition de données, sur la période d’extension d’amplification et commencez l’exécution, une fois la réaction terminée.
Enregistrez les données à des fins d’analyse. Analysez les données avec un logiciel spécialisé pour la qPCR car l’instrument sélectionne automatiquement les seuils de base. Si les résultats de l’essai pour h.
pylori sont positifs remplacez le kit de réactif par des réactifs de détection pour le gène de l’ARNr 23S et la mutation du gène gyrA dans le kit h. pylori et commencez les tests de résistance aux médicaments sur l’échantillon. Cette étude montre la détection de h.
pylori et sa résistance aux antibiotiques dans le liquide gastrique par qPCR. Parmi les échantillons positifs à H. pylori.
S2 avait des valeurs CT dans la plage de détection indiquant une double résistance à la clarithromycine et à la lévofloxacine. Les valeurs de tomodensitométrie S3 étaient dans la détection de l’infection à H. pylori et de la résistance à la lévofloxacine, mais pas pour la résistance à la clarithromycine, ce qui indique une résistance à la lévofloxacine.
De même, S4 avait des valeurs CT détectables pour l’infection à H. pylori et la résistance à la clarithromycine, mais pas pour la résistance à la lévofloxacine, suggérant une résistance à la clarithromycine. Le S5 avait des valeurs CT détectables uniquement pour h.
infection à pylori indiquant une sensibilité aux deux antibiotiques et permettant un traitement avec l’un ou l’autre médicament.
