Essai de migration de cellules stromales mésenchymateuses dérivées de tissus adipeux murins

Traiter le passage de deux AdMSC avec des milieux contenant 10 nanogrammes par millilitre de TNF alpha pendant 24 heures ou sans TNF alpha pour les cellules non stimulées. Après avoir lavé et incubé les cellules dans un milieu sans sérum pendant quatre heures, ajoutez 25 000 AdMSC à chaque insert et incubez pendant 24 heures à 37 degrés Celsius. Aspirez le contenu des deux puits et de l’insert, puis lavez deux fois avec du PBS en laissant un millilitre de PBS dans chaque puits.

À l’aide d’une pince, retirez les inserts un par un et essuyez doucement mais soigneusement la chambre supérieure avec un coton-tige pour éliminer les cellules non migrées. Aspirer le PBS restant et pipeter 500 microlitres de solution de violet cristallin dans le puits et la chambre supérieure de l’insert. Aspirer la solution de violet cristallin du puits et de la chambre supérieure de l’insert après une heure d’incubation.

Après avoir lavé et essuyé la chambre supérieure, placez l’insert dans une nouvelle plaque à 24 puits contenant un millilitre de PBS. À l’aide d’un microscope inversé avec une caméra, imagez quatre zones aléatoires vers le centre de l’insert sous un objectif 10 fois. Téléchargez les images dans le logiciel de traitement d’image préféré et ajustez l’arrière-plan pour un contraste amélioré avec les cellules colorées en violet.

CLIA infectés par 22L ont montré une expression accrue de l’ARNm pour les marqueurs inflammatoires CCL2, CCL5 et IL1 bêta, et le marqueur astrocytaire S100 bêta par rapport à ceux traités par NBH. La coculture avec des AdMSC a diminué l’expression des cytokines inflammatoires CCL2, CCL5 et IL1 bêta, mais pas du TNF alpha pour les cellules infectées par MBH et 22L. Les BV2 co-cultivées avec des ADMsc ont montré une diminution de l’ARNm pour les marqueurs inflammatoires IL1 bêta, IL-6, TNF alpha et la protéine du complément C1qa dans les cellules traitées NBH et RML.

De plus, les AdMSC ont diminué le gène de la microglie M1 CD16 et augmenté le marqueur de la microglie M2 ARG-1. L’essai de migration in vitro a suggéré que les ADMsc ont montré une migration significative vers les milieux contenant 1 % de RML.