Commencez par transférer l’animal anesthésié dans le cadre stéréotaxique, puis fixez la tête dans le cône nasal et les barres auriculaires. Placez les sondes pour mesurer le pouls, la saturation en oxygène du pouls, la pression artérielle et la température de l’animal. Appliquez une pommade pour les yeux.
Enlevez les poils avec une crème dépilatoire et nettoyez le cuir chevelu de manière aseptique avec trois passages d’iode et d’alcool. Pour une étude terminale, retirez le cuir chevelu à l’aide de ciseaux chirurgicaux et exposez le crâne à environ trois millimètres de la suture lamboïde caudale et à trois millimètres frontal du bregma. Exciser le cuir chevelu pariétalement pour exposer la partie interne du muscle temporal des deux côtés.
Ensuite, retirez tout tissu conjonctif sous-cutané résiduel afin que le crâne soit propre et sec pour appliquer les électrodes de stimulation. Ensuite, appliquez un gel conducteur sur le côté des électrodes qui seront en contact avec le crâne. Placez l’électrode sur ce muscle temporal et fixez-la avec de la super colle chirurgicale autour du bord à des endroits intermittents.
Ensuite, appliquez de la pâte de lidocaïne sur le muscle temporal et le cuir chevelu des deux côtés sans perturber les électrodes. Testez l’impédance des électrodes de stimulation extracrânienne. Ensuite, placez la souris sous un appareil d’imagerie par chatoiement laser sans électrodes d’enregistrement intracrâniennes.
Pour appliquer une stimulation entre les deux électrodes tACS du crâne, utilisez un dispositif de stimulation commercial compatible avec l’homme qui délivre un courant constant. Avant la stimulation, obtenez une ligne de base claire. Appliquez de brèves périodes de stimulation marche/arrêt à différentes amplitudes de chaque côté du crâne.
Assurez-vous d’avoir une base de référence claire après la stimulation. Une fois que les électrodes de stimulation extracrânienne sont placées quatre millimètres latéralement de chaque côté du crâne, marquez la position des trous de bavure à deux millimètres de chaque côté de la ligne médiane, à quatre millimètres les uns des autres et orthogonales à la suture sagittale. Ensuite, percez deux trous de bavure pour les électrodes en verre.
Remplissez ces trous de bavure avec de l’huile minérale stérile pour empêcher le courant de pénétrer dans le crâne à partir des électrodes extracrâniennes. Ensuite, remplissez les micro-électrodes en verre avec 0,2 molaire de chlorure de sodium et placez-les à l’aide d’un micro-manipulateur dans les deux trous de bavure placés latéralement à la suture sagittale. Placez les micro-électrodes en verre dans les trous de bavure.
Ensuite, testez l’impédance des électrodes de stimulation extracrânienne après la mise en place du trou de bavure pour vérifier que celles-ci n’interfèrent pas avec le flux de courant dans le cerveau. Pour mesurer le débit sanguin cérébral résultant de la stimulation extracrânienne, placez la souris sous un appareil d’imagerie par chatoiement laser avec des électrodes d’enregistrement intracrâniennes. Une fois insérées dans le cerveau, effectuez des profils de profondeur à différentes profondeurs symétriques pour vous assurer que ces micro-électrodes en verre sont à environ un millimètre dans le cortex cérébral.
Utilisez un système de numérisation pour enregistrer les données continues des sondes Doppler et des micro-électrodes sur une durée de référence suffisamment stable. Ensuite, appliquez une stimulation marche/arrêt et testez la stimulation crânienne supplémentaire. Pour que les expériences induisent une dépression d’étalement, ajoutez un troisième trou de bavure sur le côté droit du crâne, 1,5 millimètre de suture rostrale à coronale et un millimètre de suture frontale latérale à postérieure.
Remplissez ce trou de bavure avec du KCL pour une application ultérieure. En réponse à un tACS de faible intensité, des données ont été obtenues pour les enregistrements électriques intracrâniens directs en courant continu et les enregistrements Doppler bilatéraux au laser du flux sanguin cérébral. Une petite réponse a été observée en réponse à un stimulus de 0,75 milliampère, tandis qu’une réponse plus importante a été observée en réponse à un stimulus d’un milliampère.
Pour les traces de flux sanguin électrique et cérébral, les réponses étaient asymétriques entre le côté droit et le côté gauche du crâne. L’imagerie laser du flux sanguin cérébral pendant les crises a montré une augmentation du flux sanguin en réponse à la stimulation, qui était diffusée uniformément dans tout le cortex. Après la stimulation, le flux sanguin est revenu à la ligne de base.
